Υπέρβαση του Παραδόξου BCS Τάξης IV στα Σενολυτικά: Νανο-μικκυλιακή Χορήγηση Υδρόφοβων Φλαβονοειδών για Στοχευμένη Κάθαρση της Κυτταρικής Γήρανσης
Επιτελική σύνοψη
Σε όλη την παρεχόμενη βιβλιογραφία, η fisetin και η quercetin εμφανίζονται επανειλημμένα ως βιοδραστικά φλαβονοειδή των οποίων η απόδοση σε πραγματικές συνθήκες περιορίζεται από την έκθεση που καθορίζεται από τη μορφοποίηση, με πολλαπλές πηγές να περιγράφουν ρητά την πτωχή υδατοδιαλυτότητα και τη χαμηλή μετρήσιμη βιοδιαθεσιμότητα για τα συμβατικά σκευάσματα ή διαλύματα/εναιωρήματα.[1–4] Πολλαπλές νανο- και λιπιδικές προσεγγίσεις (λιποσώματα, νανολιποσώματα, πολυμερή μικκύλια, νανοεναιωρήματα, νανογαλακτώματα, nanocochleates, SNEDDS) παρουσιάζονται ως πρακτικές στρατηγικές για τη βελτίωση της συστηματικής έκθεσης και/ή της κινητικής απορρόφησης, συχνά με μεγάλα ποσοτικά κέρδη στην AUC ή τη σχετική βιοδιαθεσιμότητα.[3–9] Το ισχυρότερο ανθρώπινο φαρμακοκινητικό σήμα στο σύνολο δεδομένων είναι ένα υβριδικό σύστημα fisetin μικκυλίων σε υδρογέλη (FF-20), το οποίο αύξησε την AUC0–12h της fisetin 26.9 φορές και τη Cmax από 9.97 ng/mL σε 238.2 ng/mL σε σύγκριση με έναν μη μορφοποιημένο συγκριτικό παράγοντα, επεκτείνοντας παράλληλα το χρονικό παράθυρο κατά το οποίο η fisetin ήταν ανιχνεύσιμη στο πλάσμα.[4]
Σενολυτικό σκεπτικό
Εντός αυτού του συνόλου δεδομένων, η fisetin πλαισιώνεται ρητά ως σενοθεραπευτικό ή σενολυτικό φλαβονοειδές σε πολλαπλές πηγές, συμπεριλαμβανομένης μιας μελέτης που επέλεξε τη fisetin ειδικά ως ένα «καλά μελετημένο σενοθεραπευτικό φάρμακο» για δοκιμή σε λιποσώματα και μιας δήλωσης ανασκόπησης ότι η fisetin έχει «σενολυτικές επιδράσεις».[10, 11] Προκλινικά in vivo στοιχεία που αναφέρονται στα παρεχόμενα αποσπάσματα αναφέρουν ότι, μεταξύ δέκα φυσικών φλαβονοειδών που δοκιμάστηκαν in vivo, η fisetin αναφέρθηκε ως η «πιο ισχυρή σενολυτική ένωση», μειώνοντας τους δείκτες γήρανσης σε προγηριακούς και ηλικιωμένους μύες.[12] Ωστόσο, το μόνο άμεσο πείραμα σε μοντέλο γήρανσης που περιλαμβάνεται στο σύνολο δεδομένων (γήρανση επαγόμενη από doxorubicin σε κύτταρα A549 και WI38) δεν διαπίστωσε επιλεκτική σενόλυση για την ελεύθερη fisetin ή τα φορτωμένα με fisetin λιποσώματα σε δοκιμασίες βιωσιμότητας, ενώ εξακολουθούσε να παρατηρείται σενομορφική τροποποίηση των SASP κυτταροκινών IL-6 και IL-8 μέσω ELISA.[10]
Στρατηγικές λιποσωμικής εγκλεισμού
Η λιποσωμική fisetin αντιπροσωπεύεται από πολλαπλές προσεγγίσεις παρασκευής και χαρακτηρισμού, συμπεριλαμβανομένης μιας μεθόδου λεπτής στοιβάδας / λεπτής μεμβράνης χρησιμοποιώντας καθορισμένα φωσφολιπίδια και χοληστερόλη, καθώς και μιας πλατφόρμας νανολιποσωμάτων εξάτμισης λεπτής μεμβράνης με προαιρετική επικάλυψη υαλουρονικού οξέος για σταθερότητα και αποτελέσματα μικκυλιοποίησης στη φάση της πέψης.[10, 13] Σε μια in vitro μελέτη γήρανσης, τα λιποσώματα παρασκευάστηκαν με ανάμειξη DOPC, DSPE και χοληστερόλης σε οργανικό διαλύτη, σχηματίζοντας μια λιπιδική μεμβράνη, επανυδάτωση σε ρυθμιστικό διάλυμα HEPES και εξώθηση μέσω μεμβρανών πολυανθρακικού έως τα 100 nm για τη λήψη ομοιόμορφων λιποσωμάτων.[10] Αυτά τα λιποσώματα εμφάνισαν Z-average 115.9 ± 0.9 nm (PDI 0.155 ± 0.004) και ζ-δυναμικό −20.3 ± 0.6 mV όταν ήταν κενά, ενώ ο εγκλεισμός της fisetin μείωσε το μέγεθος στα 95.1 ± 1.0 nm (PDI 0.178 ± 0.008) και μετέτοπισε το ζ-δυναμικό στα −11.6 ± 1.2 mV, με αποτελεσματικότητα εγκλεισμού 13.68%.[10]
Ένα ξεχωριστό σύστημα νανολιποσωμάτων χρησιμοποίησε λεκιθίνη και fisetin σε αναλογία μάζας 25:1 με συγκέντρωση fisetin 0.8 mg/mL, το οποίο παρήχθη με εξάτμιση λεπτής μεμβράνης και υπερήχηση (2 min στα 40 W/cm²), αποδίδοντας ορθογώνια νανολιποσώματα ~80 nm με PDI περίπου 0.3.[13] Η επικάλυψη με υαλουρονικό οξύ (HA) παρασκευάστηκε με διάλυση HA σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα και ανάμειξη με νανολιποσώματα σε αναλογία όγκου 1:10 με ολονύκτια ανάδευση, και το μοριακό βάρος του HA επηρέασε την αποτελεσματικότητα εγκλεισμού (90–95% στα 3/35/90–100 kDa, μειούμενη στο 79% στα 150–250 kDa και στο 74% στα 1000–1500 kDa).[13]
Πολυμερή και αυτοσυναρμολογούμενα μικκύλια
Τα πολυμερή μικκύλια περιγράφονται ρητά στο σύνολο δεδομένων ως νανοκλίμακας συγκροτήματα πυρήνα/κέλυφους που σχηματίζονται από αμφίφιλα συμπολυμερή κατά συστάδες, και πολλαπλά συστήματα μικκυλίων quercetin παρέχουν ποσοτικές βελτιώσεις της από του στόματος PK.[2, 5, 7] Σε επίμυες, ένα μικκύλιο MPEG-b-PLLA quercetin (παρασκευασμένο με ενυδάτωση λεπτής μεμβράνης) είχε μέγεθος σωματιδίων 88.5 ± 2.6 nm με PDI 0.13 ± 0.04, αποτελεσματικότητα εγκλεισμού 82.5 ± 2.1% και ζ-δυναμικό −8.72 ± 1.03 mV.[7] Αυτό το μικκύλιο αύξησε την AUC0–∞ από 4633.71 ± 557.67 h·ng/mL (υδατικό εναιώρημα) σε 41677.10 ± 4573.95 h·ng/mL και αναφέρθηκε ρητά ως αύξηση 9 φορές στη σχετική από του στόματος βιοδιαθεσιμότητα, με υψηλότερη Cmax (1920.83 ± 250.14 ng/mL έναντι 628.67 ± 64.66 ng/mL) και καθυστερημένη Tmax (7.3 ± 1.6 h έναντι 3.0 ± 1.1 h).[7]
Μια δεύτερη προσέγγιση μικκυλίων quercetin χρησιμοποίησε μικκύλια Soluplus παρασκευασμένα με τροποποιημένη διασπορά μεμβράνης (soluplus συν F127), στην οποία ένα θεωρητικό φορτίο φαρμάκου 7% παρήγαγε μέγεθος σωματιδίων 79.00 ± 2.24 nm με PDI 0.154 ± 0.044, αποτελεσματικότητα εγκλεισμού 95.91% ± 4.05% και ζ-δυναμικό −17.10 ± 2.30 mV.[2] Σε σκύλους beagle, αυτά τα μικκύλια επέκτειναν την ανιχνευσιμότητα της quercetin από 24 h (ελεύθερο φάρμακο) σε 48 h (μικκύλιο) και αύξησαν τη Cmax από 5.24 μg·mL−1 σε 7.56 μg·mL−1, ενώ ανέφεραν χρόνο ημιζωής 2.19 φορές μεγαλύτερο από την καθαρή quercetin.[2]
Πλατφόρμες στερεών λιπιδίων και νανοσωματιδίων
Πέρα από τα μικκύλια και τα λιποσώματα, το σύνολο δεδομένων περιλαμβάνει πολλαπλές πλατφόρμες νανοσωματιδίων που εκτείνονται σε πολυμερή νανοσωματίδια (PLGA), πρωτεϊνικά νανοσωματίδια (βασισμένα σε BSA), νανοσωματίδια ιοντικής πηκτωματοποίησης χιτοζάνης και νανοεναιωρήματα/νανοκρυστάλλους, το καθένα με λεπτομερείς μετρήσεις μεγέθους και εγκλεισμού.[1, 14–16] Τα νανοσωματίδια PLGA για τη fisetin αναπτύχθηκαν για αξιολόγηση προσανατολισμένη στην ενδοφλέβια χορήγηση, με μια ενδεικτική μορφοποίηση (NP4) να αναφέρεται σε ~330 nm μέσο μέγεθος σωματιδίων, ζ-δυναμικό −7.2 mV, PDI 0.25, αποτελεσματικότητα εγκλεισμού 83.58% και φορτίο φαρμάκου 13.93%.[17] Ένα δεύτερο σύστημα νανοσωματιδίων PLGA για τη fisetin (FST-NP) ανέφερε μέσο μέγεθος 187.9 nm, PDI 0.121, ζ-δυναμικό −29.2 mV και αποτελεσματικότητα εγκλεισμού 79.3%, και παρήγαγε 4.9×, 3.2× και 2.3× υψηλότερη διαπερατότητα από το εναιώρημα σε μοντέλο ανεστραμμένου εντερικού σάκου σε δωδεκαδάκτυλο/νήστιδα/ειλεό.[15]
Τα νανοσωματίδια fisetin στοχευμένα σε φυλλικό οξύ (FFANPs) αναφέρθηκαν ως μονοδιασπαρμένα σφαιρικά σωματίδια 150 nm με PDI 0.117 και υψηλή αποτελεσματικότητα εγκλεισμού (92.36% ± 3.84) με ικανότητα φόρτωσης 8.39% ± 3.04, υποστηρίζοντας ένα παράδειγμα στόχευσης υποδοχέων αντί για ένα παράδειγμα από του στόματος έκθεσης εντός του παρεχόμενου αποσπάσματος.[14] Τα νανοσωματίδια fisetin ιοντικής πηκτωματοποίησης χιτοζάνης/TPP (FNPs) είχαν μέσο μέγεθος 363.1 ± 17.2 nm και ζ-δυναμικό +17.7 ± 0.1 mV, με αποτελεσματικότητα εγκλεισμού 78.79 ± 7.7% και ικανότητα φόρτωσης 37.46 ± 6.6%.[1]
Αυτο-γαλακτωματοποιούμενα συστήματα και συστήματα νανογαλακτωμάτων
Το σύνολο δεδομένων περιγράφει τόσο τις έννοιες SNEDDS σε επίπεδο ορισμού όσο και συγκεκριμένα συστήματα νανογαλακτωμάτων με in vivo αποτελέσματα PK για τη fisetin, δίνοντας έμφαση στην κινητική απορρόφησης που καθοδηγείται από τη μορφοποίηση και στην αποτελεσματικότητα της δόσης σε μοντέλα νόσων.[5, 6] Για τη fisetin, μια βελτιστοποιημένη μορφοποίηση νανογαλακτώματος (nanoemulsion 9) αποτελούνταν από Miglyol 812 N (10%), Labrasol (10%), Tween 80 (2.5%), Lipoid E80 (1.2%), γλυκερόλη (2.25%), NaOH (0.1N) σε pH 7 και νερό έως 100%, με διάμετρο νανοσωματιδίων 146 ± 3 nm και πολύ χαμηλό PDI 0.015 που αναφέρθηκε για το παρασκεύασμα που περιείχε Miglyol.[6] Η ίδια οικογένεια νανογαλακτωμάτων χαρακτηρίστηκε επίσης ότι έχει διάμετρο σταγονιδίων 153 ± 2 nm, αρνητικό ζ-δυναμικό −28.4 ± 0.6 mV και PDI 0.129, και το νανογαλάκτωμα αναφέρθηκε σταθερό στους 4 °C για 30 ημέρες με διαχωρισμό φάσεων στους 20 °C.[6]
Φαρμακοκινητικά, η ενδοφλέβια χορήγηση αυτού του νανογαλακτώματος fisetin στα 13 mg/kg αναφέρθηκε ότι δεν εμφάνισε σημαντική διαφορά στη συστηματική έκθεση σε σύγκριση με την ελεύθερη fisetin, ενώ η ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση παρήγαγε μια αύξηση 24 φορές στη σχετική βιοδιαθεσιμότητα σε σύγκριση με την ελεύθερη fisetin, η οποία αποδόθηκε στην ταχύτερη απορρόφηση, όπως αντικατοπτρίζεται από έναν συντομότερο μέσο χρόνο απορρόφησης (MAT 1.97 h έναντι 5.98 h).[6]
Για την quercetin, μια μελέτη SNEDDS περιέγραψε μια βελτιστοποιημένη νανογαλακτωματοποιούμενη μορφοποίηση χρησιμοποιώντας τριακετίνη ως ελαιώδη φάση, Tween 20 ως επιφανειοδραστικό και αιθανόλη ως συν-επιφανειοδραστικό, με μέγεθος σωματιδίων NE4 11.96 nm και αναφερόμενο υψηλό περιεχόμενο φαρμάκου (~97.98% έως 100.88%).[18]
Ποσοτικά κέρδη βιοδιαθεσιμότητας
Η βιβλιογραφία που παρατίθεται εδώ υποστηρίζει ένα συνεκτικό πρότυπο: τα συστήματα νανο/λιπιδικής χορήγησης μπορούν να μετατοπίσουν την έκθεση κατά πολλαπλάσια σε σχέση με τα συμβατικά διαλύματα, εναιωρήματα ή μη μορφοποιημένους συγκριτικούς παράγοντες, με τις μεταβολές να αναφέρονται απευθείας σε πολλαπλές ανεξάρτητες μελέτες και ανασκοπήσεις.[3–5, 7–9] Ο παρακάτω πίνακας ενοποιεί τα αναφερόμενα κέρδη και τα βασικά καταληκτικά σημεία PK ακριβώς όπως αναφέρονται στις πηγές, χρησιμοποιώντας τη σχετική βιοδιαθεσιμότητα βάσει AUC όπου είναι διαθέσιμη.
Περιορισμοί πρώτης διόδου και απορρόφησης
Ενώ το σύνολο δεδομένων δεν ποσοτικοποιεί άμεσα τις οδούς ηπατικού μεταβολισμού, αρκετές μελέτες καταδεικνύουν λειτουργικά ότι η μορφοποίηση μπορεί να ελέγξει τη διαδικασία απορρόφησης και τη χρονική πορεία, συμπεριλαμβανομένης της ταχύτερης απορρόφησης (συντομότερο MAT) για το ενδοπεριτοναϊκά χορηγούμενο νανογαλάκτωμα fisetin και της παρατεταμένης ανιχνευσιμότητας για το ανθρώπινο FF-20 σε σύγκριση με έναν μη μορφοποιημένο συγκριτικό παράγοντα.[4, 6] Για την quercetin, πολλαπλοί από του στόματος νανοφορείς παρατείνουν την παραμονή στο συστηματικό σύστημα, συμπεριλαμβανομένων των νανοσωματιδίων καζεΐνης που διατήρησαν μετρήσιμα επίπεδα στο πλάσμα έως και 72 h (έναντι 24 h για την κατάσταση νανοσωματιδίων χωρίς κυκλοδεξτρίνη) και των μικκυλίων Soluplus που επέκτειναν την ανίχνευση στις 48 h σε σύγκριση με τις 24 h για το ελεύθερο φάρμακο σε σκύλους.[2, 3] Τα δεδομένα δείχνουν επίσης ότι οι νανοφορείς μπορούν να μετατοπίσουν το Tmax προς οποιαδήποτε κατεύθυνση ανάλογα με την αρχιτεκτονική του συστήματος, όπως το καθυστερημένο Tmax στα μικκύλια MPEG-b-PLLA quercetin (7.3 h έναντι 3.0 h) και το βραχυμένο Tmax στο γαλάκτωμα Pickering quercetin (1.75 h έναντι 3.33 h).[7, 19]
Αναλυτική επικύρωση
Το σύνολο δεδομένων παρέχει εκτενείς αποδείξεις ότι η ποσοτική αξιολόγηση των νανομορφοποιήσεων φλαβονοειδών βασίζεται σε μεγάλο βαθμό στην υγρή χρωματογραφία (HPLC/UPLC) και την LC-MS/MS, με πρόσθετη χρήση μεθόδων απορρόφησης UV-Vis και φθορισμού για τον χαρακτηρισμό της μορφοποίησης και τις δοκιμασίες περιεχομένου.[1, 4, 7, 9, 10, 13] Στη φαρμακοκινητική της ανθρώπινης fisetin για το FF-20, η fisetin και ο μεταβολίτης της geraldol ποσοτικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας UPLC-ESI-MS/MS (QTRAP) σε λειτουργία αρνητικών ιόντων MRM μετά από εκχύλιση με ακετονιτρίλιο και διήθηση, και το περιεχόμενο της fisetin μετρήθηκε επίσης με επικυρωμένη ανάλυση HPLC.[4] Στη φαρμακοκινητική των μικκυλίων quercetin σε επίμυες, μια μέθοδος τριπλού τετραπόλου LC-MS/MS ποσοτικοποίησε την quercetin με μετάπτωση MRM m/z 301.1 → 151.0 με χρωματογραφικό διαχωρισμό σε στήλη Agilent Eclipse-C18 υπό ισοκρατική κινητή φάση νερού/μεθανόλης.[7]
Αρκετές εργασίες μορφοποίησης χρησιμοποίησαν HPLC-UV ή HPLC-DAD για δοκιμασίες περιεχομένου και απελευθέρωσης/διαπερατότητας, συμπεριλαμβανομένης της ποσοτικοποίησης του νανογαλακτώματος fisetin με HPLC αντίστροφης φάσης με ανίχνευση UV στα 360 nm και της ποσοτικοποίησης των φορτωμένων με quercetin νανοσωματιδίων καζεΐνης με HPLC-UV με DAD στα 370 nm.[3, 6] Ορισμένα συστήματα χρησιμοποίησαν φασματοφωτομετρία UV-Vis για την εκτίμηση της συγκέντρωσης fisetin ή quercetin (π.χ. fisetin στα 364 nm για νανοσωματίδια χιτοζάνης, quercetin στα 374 nm για διάλυση/περιεχόμενο φαρμάκου SNEDDS), και μια μελέτη λιποσωμικής fisetin ποσοτικοποίησε τη συγκέντρωση fisetin με φασματοφθορισμομετρία με διέγερση/εκπομπή στα 418/486 nm.[1, 10, 18]
Αποτελέσματα γήρανσης και αποτελεσματικότητας
Τα αποτελέσματα σε άμεσα μοντέλα γήρανσης στο σύνολο δεδομένων κυριαρχούνται επί του παρόντος από μια in vitro μελέτη που δοκιμάζει τη fisetin και τα φορτωμένα με fisetin λιποσώματα σε μοντέλα γήρανσης επαγόμενης από doxorubicin, στην οποία ούτε η ελεύθερη fisetin ούτε τα φορτωμένα με fisetin λιποσώματα προκάλεσαν επιλεκτική απόπτωση των γηρασμένων έναντι των μη γηρασμένων κυττάρων σε δοκιμασίες βιωσιμότητας.[10] Η ίδια μελέτη ανέφερε ωστόσο σενομορφική δραστηριότητα που αποδείχθηκε από τη μειωμένη έκκριση IL-6 και IL-8 στα γηρασμένα κύτταρα και πλαισίωσε τόσο την ελεύθερη όσο και τη λιποσωμική fisetin ως ρυθμιστές του SASP μέσω ανάλυσης ELISA.[10] Συμπληρώνοντας αυτά τα ευρήματα, ένας εξωτερικός in vivo σενολυτικός ισχυρισμός που περιλαμβάνεται στα αποσπάσματα αναφέρει ότι η fisetin αναφέρθηκε ως το πιο ισχυρό σενολυτικό μεταξύ δέκα φλαβονοειδών που δοκιμάστηκαν in vivo, μειώνοντας τους δείκτες γήρανσης σε προγηριακούς και ηλικιωμένους μύες, αλλά χωρίς λεπτομέρειες μορφοποίησης στο παρεχόμενο σύνολο παραθέσεων.[12]
Εκτός των καταληκτικών σημείων γήρανσης, πολλαπλές νανομορφοποιήσεις καταδεικνύουν αποτελεσματικότητα σε μοντέλα νόσων συνεπή με τις βελτιώσεις στην έκθεση, συμπεριλαμβανομένου του νανογαλακτώματος fisetin που πέτυχε μείωση του όγκου του όγκου κατά 53% στα 36.6 mg/kg έναντι μιας ~6 φορές υψηλότερης δόσης ελεύθερης fisetin (223 mg/kg) για παρόμοια αναστολή της ανάπτυξης του όγκου σε επίμυες με καρκίνωμα πνεύμονα Lewis.[6] Άλλα παραδείγματα αποτελεσματικότητας εκτός γήρανσης περιλαμβάνουν το νανοεναιώρημα fisetin που βελτιώνει τη μνήμη και τη μάθηση και μειώνει τα επίπεδα MAO-A σε μύες με άνοια επαγόμενη από Aβ(25–35), και τα νανοσωματίδια χιτοζάνης fisetin που μειώνουν το mRNA των φλεγμονωδών κυτταροκινών (TNF-α και IL-6) και αυξάνουν την IL-10 σε χονδροκύτταρα προεπεξεργασμένα με IL-1β, ενώ εμποδίζουν τη μείωση των μεταγράφων που σχετίζονται με τον χόνδρο (Sox-9 και COL2).[1, 16]
Μεταφραστική κατάσταση
Το σύνολο δεδομένων περιλαμβάνει πολλαπλές μελέτες βιοδιαθεσιμότητας σε εθελοντές για μορφοποιήσεις τόσο fisetin όσο και quercetin, παρέχοντας άμεση μεταφραστική συνάφεια για τους ισχυρισμούς βελτίωσης της έκθεσης.[4, 8] Για τη fisetin, ένας τυχαιοποιημένος, διπλά τυφλός, διασταυρούμενος σχεδιασμός σε 15 υγιείς εθελοντές σύγκρινε μια δόση 1000 mg UF με 1000 mg FF-20 (που παρείχε 192 mg fisetin) με περίοδο έκπλυσης 10 ημερών, επιτρέποντας την άμεση ενδοατομική σύγκριση PK που έδειξε σημαντικά υψηλότερη AUC και Cmax για το FF-20 και μεγαλύτερη διάρκεια ανιχνευσιμότητας για τη fisetin στο πλάσμα.[4] Για την quercetin, μια μη τυφλή διασταυρούμενη μελέτη σε 12 υγιείς ενήλικες εθελοντές αξιολόγησε τρία προϊόντα quercetin και ανέφερε ότι η μήτρα υγρών μικκυλίων LipoMicel πέτυχε αυξήσεις 8 φορές στην AUC και 9 φορές στη Cmax σε σύγκριση με την ελεύθερη quercetin, με Cmax 182.85 ng/mL σε Tmax 0.5 h.[8]
Κενά και μελλοντικές κατευθύνσεις
Εντός των ορίων των παρεχόμενων στοιχείων, ένα βασικό κενό είναι η περιορισμένη σύζευξη των βελτιώσεων της από του στόματος βιοδιαθεσιμότητας με τα άμεσα καταληκτικά σημεία κάθαρσης της γήρανσης (π.χ. επιλεκτική εξάλειψη των γηρασμένων κυττάρων), επειδή το μόνο ρητό πείραμα σε μοντέλο γήρανσης εδώ έδειξε σενομορφική μείωση του SASP χωρίς σενολυτική επιλεκτικότητα τόσο για την ελεύθερη fisetin όσο και για τα φορτωμένα με fisetin λιποσώματα.[10] Ένα άλλο κενό είναι ότι ορισμένες πλατφόρμες αναφέρουν σημαντικές βελτιώσεις στη βιοπροσβασιμότητα ή τη διαπερατότητα (π.χ. νανολιποσώματα fisetin που αυξάνουν τη βιοπροσβασιμότητα στο 88.9–92.5% έναντι 7.2% σε χύδην έλαιο και νανοσωματίδια PLGA fisetin που αυξάνουν την εντερική διαπερατότητα έως και 4.9× σε μοντέλο ανεστραμμένου εντερικού σάκου) χωρίς παράλληί in vivo συστηματική επιβεβαίωση PK στα αποσπάσματα που παρέχονται εδώ.[13, 15]
Μια πρακτική μελλοντική κατεύθυνση που υπονοείται από τα στοιχεία είναι η στενότερη ενσωμάτωση του χαρακτηρισμού της μορφοποίησης με την επικυρωμένη βιοαναλυτική μέτρηση, καθώς το σύνολο δεδομένων δείχνει ένα ευρύ μεθοδολογικό φάσμα — από LC-MS/MS και UHPLC-HRMS στην κλινική PK έως δοκιμασίες UV-Vis για τον εγκλεισμό ή τη διάλυση στον προσυμπτωματικό έλεγχο μορφοποίησης — υποδηλώνοντας ότι οι εναρμονισμένες στρατηγικές ποσοτικοποίησης θα μπορούσαν να βελτιώσουν τη συγκρισιμότητα μεταξύ των μελετών.[1, 4, 8, 18] Μια δεύτερη μελλοντική κατεύθυνση είναι η επιλογή μορφοποίησης προσαρμοσμένης στα επιθυμητά προφίλ απορρόφησης, επειδή οι μελέτες δείχνουν τόσο καθυστερημένο όσο και επιταχυνόμενο Tmax ανάλογα με τον τύπο του φορέα (π.χ. μικκύλια MPEG-b-PLLA που καθυστερούν το Tmax έναντι γαλακτωμάτων Pickering που το βραχύνουν), υποδηλώνοντας ότι η «βέλτιστη» μορφοποίηση μπορεί να διαφέρει ανάλογα με τον θεραπευτικό στόχο και το παράθυρο δοσολογίας.[7, 19]
