Overcoming the BCS Class IV Paradox in Senolytics: Nano-Micellar Delivery of Hydrophobic Flavonoids for Targeted Cellular Senescence Clearance
บทสรุปผู้บริหาร
จากวรรณกรรมที่รวบรวมมา fisetin และ quercetin ปรากฏให้เห็นซ้ำในฐานะ bioactive flavonoids ซึ่งประสิทธิภาพในการใช้งานจริงถูกจำกัดโดยการสัมผัสสารที่ขึ้นอยู่กับข้อจำกัดของสูตรตำรับ โดยมีแหล่งข้อมูลหลายแห่งระบุอย่างชัดเจนถึงความสามารถในการละลายน้ำที่ต่ำ (poor aqueous solubility) และค่า bioavailability ที่วัดได้ต่ำสำหรับเตรียมการในรูปแบบดั้งเดิมหรือในรูปสารละลาย/สารแขวนลอย [1–4] แนวทางที่ใช้พื้นฐานของ nano- และ lipid (liposomes, nanoliposomes, polymeric micelles, nanosuspensions, nanoemulsions, nanocochleates, SNEDDS) ถูกนำเสนอในฐานะกลยุทธ์ที่นำไปใช้ได้จริงเพื่อปรับปรุง systemic exposure และ/หรือ absorption kinetics ซึ่งมักจะให้ผลลัพธ์เชิงปริมาณที่เพิ่มขึ้นอย่างมากในค่า AUC หรือ relative bioavailability [3–9] สัญญาณทางเภสัชจลนศาสตร์ (pharmacokinetics) ในมนุษย์ที่ชัดเจนที่สุดในชุดข้อมูลคือระบบ fisetin แบบ hybrid micelle-in-hydrogel (FF-20) ซึ่งช่วยเพิ่ม fisetin AUC0–12h ได้ถึง 26.9 เท่า และเพิ่ม Cmax จาก 9.97 ng/mL เป็น 238.2 ng/mL เมื่อเทียบกับกลุ่มเปรียบเทียบที่ไม่ได้เตรียมสูตรตำรับ ในขณะเดียวกันยังช่วยขยายช่วงเวลาที่สามารถตรวจวัดระดับ fisetin ในพลาสมาได้ [4]
เหตุผลสนับสนุนด้าน Senolytic
ภายในชุดข้อมูลนี้ fisetin ถูกจัดวางอย่างชัดเจนว่าเป็น senotherapeutic หรือ senolytic flavonoid ในแหล่งข้อมูลหลายแห่ง รวมถึงการศึกษาที่เลือก fisetin โดยเฉพาะในฐานะ "ยา senotherapeutic ที่ได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวาง" เพื่อทดสอบใน liposomes และบทวิจารณ์ที่ระบุว่า fisetin มี "ฤทธิ์ senolytic" [10, 11] หลักฐานพรีคลินิกใน vivo ที่อ้างถึงในข้อความที่ตัดตอนมาระบุว่า ในบรรดา natural flavonoids 10 ชนิดที่ทดสอบใน vivo นั้น fisetin ได้รับรายงานว่าเป็น "สารประกอบ senolytic ที่มีฤทธิ์แรงที่สุด" โดยช่วยลดเครื่องหมายการเสื่อมสภาพ (senescence markers) ในหนูที่มีภาวะแก่ก่อนวัยและหนูแก่ [12] อย่างไรก็ตาม การทดลองในโมเดลการเสื่อมสภาพโดยตรงเพียงครั้งเดียวที่มีอยู่ในชุดข้อมูล (การเสื่อมสภาพที่ถูกเหนี่ยวนำด้วย doxorubicin ในเซลล์ A549 และ WI38) ไม่พบการสลายเซลล์เสื่อมสภาพแบบเจาะจง (selective senolysis) สำหรับ free fisetin หรือ fisetin-loaded liposomes ในการทดสอบอัตราการรอดชีวิต (viability assays) แม้ว่าจะยังสังเกตพบการปรับเปลี่ยนแบบ senomorphic ของ SASP cytokines IL-6 และ IL-8 จากการวิเคราะห์ด้วย ELISA ก็ตาม [10]
กลยุทธ์การกักเก็บใน Liposome
Liposomal fisetin แสดงให้เห็นผ่านแนวทางการเตรียมและการวิเคราะห์คุณลักษณะที่หลากหลาย รวมถึงวิธี thin-layer / thin-film โดยใช้ phospholipids และ cholesterol ที่กำหนด ตลอดจนแพลตฟอร์ม nanoliposome แบบ thin-film evaporation ที่มีการเคลือบด้วย hyaluronic acid เป็นทางเลือกเพื่อความเสถียรและผลลัพธ์การเกิด micellarization ในระยะการย่อย [10, 13] ในการศึกษาภาวะเสื่อมสภาพใน vitro ครั้งหนึ่ง liposomes ถูกเตรียมโดยการผสม DOPC, DSPE และ cholesterol ในตัวทำละลายอินทรีย์ ทำให้เกิด lipid film แล้วเติมสารละลาย HEPES buffer เพื่อคืนรูป (rehydrating) และทำการ extrusion ผ่านแผ่นเมมเบรน polycarbonate จนถึงระดับ 100 nm เพื่อให้ได้ liposomes ที่มีความสม่ำเสมอ [10] liposomes เหล่านั้นแสดงค่า Z-average 115.9 ± 0.9 nm (PDI 0.155 ± 0.004) และค่า ζ-potential −20.3 ± 0.6 mV เมื่อว่างเปล่า ในขณะที่การกักเก็บ fisetin ช่วยลดขนาดลงเหลือ 95.1 ± 1.0 nm (PDI 0.178 ± 0.008) และเปลี่ยนค่า ζ-potential เป็น −11.6 ± 1.2 mV โดยมี encapsulation efficiency อยู่ที่ 13.68% [10]
อีกระบบ nanoliposome หนึ่งใช้ lecithin และ fisetin ที่อัตราส่วนมวล 25:1 โดยมีความเข้มข้นของ fisetin 0.8 mg/mL ผลิตโดยวิธี thin-film evaporation และ ultrasonication (2 นาทีที่ 40 W/cm²) ให้ผลลัพธ์เป็น nanoliposomes ทรงสี่เหลี่ยมขนาดประมาณ 80 nm พร้อมค่า PDI ประมาณ 0.3 [13] การเคลือบด้วย Hyaluronic acid (HA) เตรียมโดยการละลาย HA ใน phosphate buffer และผสมกับ nanoliposomes ที่อัตราส่วนปริมาตร 1:10 โดยการกวนข้ามคืน และน้ำหนักโมเลกุลของ HA มีผลต่อ encapsulation efficiency (90–95% ที่ 3/35/90–100 kDa, ลดลงเหลือ 79% ที่ 150–250 kDa และ 74% ที่ 1000–1500 kDa) [13]
Polymeric และ self-assembled micelles
Polymeric micelles ถูกอธิบายอย่างชัดเจนในชุดข้อมูลว่าเป็นโครงสร้างประกอบระดับนาโนแบบ core/shell ที่เกิดจาก amphiphilic block copolymers และระบบ quercetin micelle หลายระบบให้ผลการปรับปรุง oral PK เชิงปริมาณ [2, 5, 7] ในหนูทดลอง MPEG-b-PLLA quercetin micelle (เตรียมโดยวิธี thin-film hydration) มีขนาดอนุภาค 88.5 ± 2.6 nm โดยมี PDI 0.13 ± 0.04, encapsulation efficiency 82.5 ± 2.1% และค่า zeta potential −8.72 ± 1.03 mV [7] micelle นี้ช่วยเพิ่ม AUC0–∞ จาก 4633.71 ± 557.67 h·ng/mL (ในรูปแบบ aqueous suspension) เป็น 41677.10 ± 4573.95 h·ng/mL และมีการรายงานอย่างชัดเจนว่าเป็นการเพิ่มขึ้นของ relative oral bioavailability ถึง 9 เท่า พร้อมค่า Cmax ที่สูงขึ้น (1920.83 ± 250.14 ng/mL เทียบกับ 628.67 ± 64.66 ng/mL) และค่า Tmax ที่ล่าช้าออกไป (7.3 ± 1.6 h เทียบกับ 3.0 ± 1.1 h) [7]
แนวทาง quercetin micelle แบบที่สองใช้ Soluplus micelles ที่เตรียมโดยวิธี modified film dispersion (soluplus ร่วมกับ F127) ซึ่งการบรรจุยาทางทฤษฎีที่ 7% ให้ขนาดอนุภาค 79.00 ± 2.24 nm พร้อม PDI 0.154 ± 0.044, encapsulation efficiency 95.91% ± 4.05% และค่า zeta potential −17.10 ± 2.30 mV [2] ในสุนัขพันธุ์บีเกิล micelles เหล่านี้ขยายเวลาการตรวจพบ quercetin จาก 24 h (ยาในรูปแบบอิสระ) เป็น 48 h (ในรูป micelle) และเพิ่ม Cmax จาก 5.24 μg·mL−1 เป็น 7.56 μg·mL−1 พร้อมรายงานค่า half-life ที่ยาวนานกว่า pure quercetin ถึง 2.19 เท่า [2]
Solid lipid และ nanoparticle platforms
นอกเหนือจาก micelles และ liposomes ชุดข้อมูลยังรวมถึงแพลตฟอร์มอนุภาคนาโนที่หลากหลาย ครอบคลุมตั้งแต่อนุภาคนาโนพอลิเมอร์ (PLGA), อนุภาคนาโนโปรตีน (BSA-based), อนุภาคนาโน chitosan ionic-gelation ไปจนถึง nanosuspensions/nanocrystals โดยแต่ละรูปแบบมีรายละเอียดขนาดและตัวชี้วัดการกักเก็บ [1, 14–16] อนุภาคนาโน PLGA สำหรับ fisetin ได้รับการพัฒนาเพื่อการประเมินทางหลอดเลือดดำ โดยมีสูตรตัวอย่าง (NP4) รายงานขนาดอนุภาคเฉลี่ยที่ ~330 nm, ζ-potential −7.2 mV, PDI 0.25, encapsulation efficiency 83.58% และ drug loading 13.93% [17] ระบบอนุภาคนาโน PLGA อีกระบบสำหรับ fisetin (FST-NP) รายงานขนาดเฉลี่ย 187.9 nm, PDI 0.121, ζ-potential −29.2 mV และ encapsulation efficiency 79.3% และสามารถสร้างการซึมผ่าน (permeation) ได้สูงกว่า suspension ถึง 4.9, 3.2 และ 2.3 เท่าในโมเดล everted gut sac ตลอดช่วง duodenum/jejunum/ileum [15]
Folate-targeted fisetin nanoparticles (FFANPs) ได้รับรายงานว่าเป็นอนุภาคทรงกลมที่มีการกระจายตัวเดี่ยวขนาด 150 nm พร้อม PDI 0.117 และมีประสิทธิภาพการกักเก็บสูง (92.36% ± 3.84) โดยมี loading capacity 8.39% ± 3.04 ซึ่งสนับสนุนแนวคิดการกำหนดเป้าหมายที่ตัวรับ (receptor-targeting) มากกว่าแนวคิดการสัมผัสสารผ่านการรับประทานในข้อความที่ตัดตอนมานี้ [14] อนุภาคนาโน Chitosan/TPP ionic-gelation fisetin (FNPs) มีขนาดเฉลี่ย 363.1 ± 17.2 nm และ ζ-potential +17.7 ± 0.1 mV โดยมี encapsulation efficiency 78.79 ± 7.7% และ loading capacity 37.46 ± 6.6% [1]
ระบบ Self-emulsifying และ nanoemulsion
ชุดข้อมูลอธิบายทั้งแนวคิด SNEDDS ในระดับคำจำกัดความและระบบ nanoemulsion ที่เป็นรูปธรรมพร้อมผลลัพธ์ PK ใน vivo สำหรับ fisetin โดยเน้นที่ absorption kinetics ที่ขับเคลื่อนด้วยสูตรตำรับและประสิทธิภาพของขนาดยาในโมเดลโรค [5, 6] สำหรับ fisetin สูตร nanoemulsion ที่เหมาะสมที่สุด (nanoemulsion 9) ประกอบด้วย Miglyol 812 N (10%), Labrasol (10%), Tween 80 (2.5%), Lipoid E80 (1.2%), glycerol (2.25%), NaOH (0.1N) เพื่อปรับ pH เป็น 7 และน้ำจนครบ 100% โดยมีเส้นผ่านศูนย์กลางอนุภาคนาโน 146 ± 3 nm และรายงานค่า PDI ที่ต่ำมากคือ 0.015 สำหรับการเตรียมที่มี Miglyol [6] กลุ่ม nanoemulsion เดียวกันนี้ยังถูกวิเคราะห์ว่ามีเส้นผ่านศูนย์กลางหยดละออง 153 ± 2 nm, ค่า ζ-potential เป็นลบที่ −28.4 ± 0.6 mV และ PDI 0.129 โดย nanoemulsion มีรายงานว่ามีความเสถียรที่ 4 °C เป็นเวลา 30 วัน และเกิดการแยกชั้นที่ 20 °C [6]
ในเชิงเภสัชจลนศาสตร์ การให้ fisetin nanoemulsion ทางหลอดเลือดดำในขนาด 13 mg/kg รายงานว่าไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญใน systemic exposure เมื่อเทียบกับ free fisetin ในขณะที่การให้ทางช่องท้องสร้างความเพิ่มขึ้นของ relative bioavailability ถึง 24 เท่า เมื่อเทียบกับ free fisetin ซึ่งมีสาเหตุมาจากการดูดซึมที่เร็วกว่า โดยสะท้อนจากค่า mean absorption time ที่สั้นกว่า (MAT 1.97 h เทียบกับ 5.98 h) [6]
สำหรับ quercetin การศึกษา SNEDDS หนึ่งอธิบายสูตร nanoemulsifying ที่เหมาะสมที่สุดโดยใช้ triacetin เป็น oil phase, Tween 20 เป็น surfactant และ ethanol เป็น co-surfactant โดยอนุภาค NE4 มีขนาด 11.96 nm และรายงานปริมาณยาที่สูง (~97.98% ถึง 100.88%) [18]
การเพิ่มขึ้นเชิงปริมาณของ Bioavailability
วรรณกรรมที่ตัดตอนมานี้สนับสนุนรูปแบบที่สอดคล้องกัน: ระบบนำส่งแบบ nano/lipid สามารถเปลี่ยนระดับการสัมผัสสารได้หลายเท่าตัวเมื่อเทียบกับสารละลาย สารแขวนลอยดั้งเดิม หรือกลุ่มเปรียบเทียบที่ไม่ได้เตรียมสูตรตำรับ โดยมีการรายงาน fold-changes โดยตรงในการศึกษาและบทวิจารณ์ที่เป็นอิสระหลายฉบับ [3–5, 7–9] ตารางด้านล่างรวบรวมค่า fold-gains ที่รายงานและจุดสิ้นสุด PK หลักตามที่ระบุไว้ในแหล่งข้อมูล โดยใช้ relative bioavailability ที่อิงตามค่า AUC เมื่อมีข้อมูล
ข้อจำกัดของ First-pass และการดูดซึม
แม้ว่าชุดข้อมูลจะไม่ได้ระบุปริมาณของวิถีการเผาผลาญที่ตับ (hepatic metabolism) โดยตรง แต่การศึกษาหลายชิ้นแสดงให้เห็นในทางปฏิบัติว่าสูตรตำรับสามารถควบคุมกระบวนการและระยะเวลาของการดูดซึมได้ รวมถึงการดูดซึมที่เร็วขึ้น (MAT สั้นลง) สำหรับ fisetin nanoemulsion ที่ให้ทางช่องท้อง และการขยายเวลาที่ตรวจวัดสารได้ในมนุษย์สำหรับ FF-20 เมื่อเทียบกับกลุ่มเปรียบเทียบที่ไม่ได้เตรียมสูตรตำรับ [4, 6] สำหรับ quercetin ตัวพานาโนหลายชนิดที่ให้ทางปากช่วยยืดระยะเวลาการอยู่ในระบบร่างกาย รวมถึงอนุภาคนาโน casein ที่รักษาระดับพลาสมาที่วัดได้นานถึง 72 h (เทียบกับ 24 h สำหรับเงื่อนไขอนุภาคนาโนที่ไม่มี cyclodextrin) และ Soluplus micelles ที่ขยายการตรวจวัดได้ถึง 48 h เทียบกับ 24 h สำหรับยาในรูปแบบอิสระในสุนัข [2, 3] ข้อมูลยังแสดงให้เห็นว่าตัวพานาโนสามารถเปลี่ยน Tmax ไปในทิศทางใดทิศทางหนึ่งขึ้นอยู่กับสถาปัตยกรรมของระบบ เช่น Tmax ที่ล่าช้าใน MPEG-b-PLLA quercetin micelles (7.3 h เทียบกับ 3.0 h) และ Tmax ที่สั้นลงใน quercetin Pickering emulsion (1.75 h เทียบกับ 3.33 h) [7, 19]
การตรวจสอบความถูกต้องเชิงวิเคราะห์
ชุดข้อมูลให้หลักฐานที่กว้างขวางว่าการประเมินเชิงปริมาณของ flavonoid nanoformulations นั้นพึ่งพา liquid chromatography (HPLC/UPLC) และ LC-MS/MS อย่างหนัก โดยมีการใช้วิธีการวัดการดูดกลืนแสง UV-Vis และ fluorescence เพิ่มเติมสำหรับการวิเคราะห์คุณลักษณะของสูตรตำรับและการทดสอบปริมาณสาร [1, 4, 7, 9, 10, 13] ในเภสัชจลนศาสตร์ของ fisetin ในมนุษย์สำหรับ FF-20 มีการวัดปริมาณ fisetin และ metabolite ของมันคือ geraldol โดยใช้ UPLC-ESI-MS/MS (QTRAP) ในโหมด negative-ion MRM หลังจากสกัดด้วย acetonitrile และกรอง และยังมีการวัดปริมาณ fisetin ด้วยการวิเคราะห์ HPLC ที่ผ่านการรับรอง [4] ในเภสัชจลนศาสตร์ของ quercetin micelle ในหนู วิธี triple quadrupole LC-MS/MS ได้ใช้ในการวัดปริมาณ quercetin ผ่าน MRM transition m/z 301.1 → 151.0 โดยมีการแยกด้วยโครมาโตกราฟีบนคอลัมน์ Agilent Eclipse-C18 ภายใต้ isocratic water/methanol mobile phase [7]
งานวิจัยด้านสูตรตำรับหลายฉบับใช้ HPLC-UV หรือ HPLC-DAD สำหรับการทดสอบปริมาณสารและการปลดปล่อย/ซึมผ่านสาร รวมถึงการวัดปริมาณ fisetin nanoemulsion ด้วย reversed-phase HPLC พร้อมการตรวจวัดด้วย UV ที่ 360 nm และการวัดปริมาณ quercetin-loaded casein nanoparticle ด้วย HPLC-UV พร้อม DAD ที่ 370 nm [3, 6] บางระบบใช้ UV-Vis spectrophotometry สำหรับการประมาณความเข้มข้นของ fisetin หรือ quercetin (เช่น fisetin ที่ 364 nm สำหรับ chitosan nanoparticles; quercetin ที่ 374 nm สำหรับ SNEDDS dissolution/drug content) และการศึกษา liposomal fisetin ชิ้นหนึ่งได้วัดปริมาณความเข้มข้นของ fisetin ด้วย spectrofluorometry โดยมีการกระตุ้น/การปลดปล่อยแสงที่ 418/486 nm [1, 10, 18]
ผลลัพธ์ด้านภาวะเสื่อมสภาพและประสิทธิภาพ
ผลลัพธ์ของโมเดลการเสื่อมสภาพโดยตรงในชุดข้อมูลปัจจุบันถูกครอบคลุมโดยการศึกษาใน vitro ชิ้นหนึ่งที่ทดสอบ fisetin และ fisetin-loaded liposomes ในโมเดลการเสื่อมสภาพที่เหนี่ยวนำด้วย doxorubicin ซึ่งทั้ง free fisetin และ fisetin-loaded liposomes ต่างไม่ทำให้เกิด selective apoptosis ของเซลล์ที่เสื่อมสภาพเหนือกว่าเซลล์ปกติในการทดสอบอัตราการรอดชีวิต [10] อย่างไรก็ตาม การศึกษาเดียวกันนั้นได้รายงานกิจกรรม senomorphic ที่เห็นได้ชัดจากการลดการหลั่ง IL-6 และ IL-8 ในเซลล์ที่เสื่อมสภาพ และจัดระดับทั้ง free และ liposomal fisetin ว่ามีการปรับเปลี่ยน SASP จากการวิเคราะห์ด้วย ELISA [10] เพื่อเสริมการค้นพบเหล่านี้ ข้อกล่าวอ้างภายนอกเรื่องฤทธิ์ senolytic ใน vivo ที่รวมอยู่ในข้อความที่ตัดตอนมาระบุว่า fisetin ได้รับรายงานว่าเป็นสาร senolytic ที่มีฤทธิ์แรงที่สุดในบรรดา flavonoids 10 ชนิดที่ทดสอบใน vivo โดยลดเครื่องหมายการเสื่อมสภาพในหนูที่มีภาวะแก่ก่อนวัยและหนูแก่ แต่ไม่มีรายละเอียดของสูตรตำรับในชุดคำพูดที่จัดมาให้ [12]
นอกเหนือจากจุดสิ้นสุดด้านภาวะเสื่อมสภาพ สูตรตำรับนาโนหลายรูปแบบแสดงประสิทธิภาพในโมเดลโรคที่สอดคล้องกับการปรับปรุงการสัมผัสสาร รวมถึง fisetin nanoemulsion ที่ลดปริมาตรเนื้องอกได้ 53% ที่ขนาด 36.6 mg/kg เมื่อเทียบกับขนาด free-fisetin ที่สูงกว่าประมาณ 6 เท่า (223 mg/kg) เพื่อให้ได้การยับยั้งการเติบโตของเนื้องอกที่ใกล้เคียงกันในหนูที่เป็นมะเร็งปอดชนิด Lewis lung carcinoma [6] ตัวอย่างประสิทธิภาพที่ไม่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมสภาพอื่นๆ ได้แก่ fisetin nanosuspension ที่ปรับปรุงความจำและการเรียนรู้ และลดระดับ MAO-A ในหนูที่เป็นโรคสมองเสื่อมที่เหนี่ยวนำด้วย Aβ(25–35) และอนุภาคนาโน fisetin chitosan ที่ลด mRNA ของ inflammatory cytokine (TNF-α และ IL-6) และเพิ่ม IL-10 ใน chondrocytes ที่ถูกกระตุ้นด้วย IL-1β พร้อมทั้งป้องกันการลดลงของ transcripts ที่เกี่ยวข้องกับกระดูกอ่อน (Sox-9 และ COL2) [1, 16]
สถานะการนำไปใช้ทางคลินิก (Translational Status)
ชุดข้อมูลรวมถึงการศึกษา bioavailability ในอาสาสมัครมนุษย์หลายชิ้นสำหรับทั้งสูตรตำรับ fisetin และ quercetin ซึ่งให้ความเกี่ยวข้องโดยตรงในการนำไปใช้จริงสำหรับการกล่าวอ้างเรื่องการเพิ่มพูนการสัมผัสสาร [4, 8] สำหรับ fisetin การศึกษาแบบ randomized, double-blinded, cross-over ในอาสาสมัครสุขภาพดี 15 คน เปรียบเทียบขนาด 1000 mg ของ UF กับ 1000 mg ของ FF-20 (ซึ่งส่งมอบ fisetin 192 mg) โดยมีช่วงพักยา 10 วัน ทำให้สามารถเปรียบเทียบ PK ภายในบุคคลได้โดยตรง ซึ่งแสดงให้เห็นว่า FF-20 มี AUC และ Cmax ที่สูงกว่าอย่างเห็นได้ชัด และมีระยะเวลาที่ตรวจวัด fisetin ในพลาสมาได้ยาวนานกว่า [4] สำหรับ quercetin การศึกษา crossover แบบ non-blinded ในอาสาสมัครผู้ใหญ่สุขภาพดี 12 คน ประเมินผลิตภัณฑ์ quercetin 3 ชนิด และรายงานว่า LipoMicel liquid micelle matrix ให้ค่า AUC สูงขึ้น 8 เท่า และ Cmax สูงขึ้น 9 เท่า เมื่อเทียบกับ free quercetin โดยมี Cmax อยู่ที่ 182.85 ng/mL ที่ Tmax 0.5 h [8]
ช่องว่างและทิศทางในอนาคต
ภายใต้ขอบเขตของหลักฐานที่มีให้ ช่องว่างสำคัญคือการขาดการเชื่อมโยงระหว่างการปรับปรุง oral bioavailability เข้ากับจุดสิ้นสุดการกำจัดภาวะเสื่อมสภาพโดยตรง (เช่น การทำลายเซลล์ที่เสื่อมสภาพอย่างเฉพาะเจาะจง) เนื่องจากการทดลองโมเดลการเสื่อมสภาพเพียงชิ้นเดียวที่นี่แสดงเพียงการลดลงของ SASP แบบ senomorphic โดยไม่มีความเฉพาะเจาะจงในการสลายเซลล์ (senolytic selectivity) สำหรับทั้ง free fisetin และ fisetin-loaded liposomes [10] ช่องว่างอีกประการหนึ่งคือ แพลตฟอร์มบางอย่างรายงานการปรับปรุงอย่างมากในด้าน bioaccessibility หรือการซึมผ่าน (เช่น fisetin nanoliposomes ที่เพิ่ม bioaccessibility เป็น 88.9–92.5% เทียบกับ 7.2% ในน้ำมันปริมาณมาก และอนุภาคนาโน PLGA fisetin ที่เพิ่มการซึมผ่านของลำไส้ได้สูงถึง 4.9 เท่าในโมเดล everted gut sac) โดยไม่มีการยืนยัน PK ในระบบร่างกายใน vivo ควบคู่กันในข้อความที่ตัดตอนมานี้ [13, 15]
ทิศทางในอนาคตที่นำไปใช้ได้จริงซึ่งบอกเป็นนัยจากหลักฐานคือ การบูรณาการการวิเคราะห์คุณลักษณะของสูตรตำรับเข้ากับการวัดทางชีววิเคราะห์ที่ผ่านการรับรองให้แน่นแฟ้นยิ่งขึ้น เนื่องจากชุดข้อมูลแสดงให้เห็นถึงช่วงวิธีการที่กว้างขวาง ตั้งแต่ LC-MS/MS และ UHPLC-HRMS ใน PK ทางคลินิก ไปจนถึงการทดสอบ UV-Vis สำหรับการกักเก็บหรือการละลายในการคัดกรองสูตรตำรับ ซึ่งบ่งชี้ว่ากลยุทธ์การหาปริมาณที่เป็นเอกภาพสามารถปรับปรุงความสามารถในการเปรียบเทียบระหว่างการศึกษาได้ [1, 4, 8, 18] ทิศทางในอนาคตประการที่สองคือการเลือกสูตรตำรับที่ปรับให้เหมาะสมกับโปรไฟล์การดูดซึมที่ต้องการ เนื่องจากการศึกษาแสดงให้เห็นทั้ง Tmax ที่ล่าช้าและเร่งขึ้นขึ้นอยู่กับประเภทของตัวพา (เช่น MPEG-b-PLLA micelles ที่ทำให้ Tmax ล่าช้า เทียบกับ Pickering emulsions ที่ทำให้ Tmax สั้นลง) ซึ่งหมายความว่าสูตรตำรับ "ที่ดีที่สุด" อาจแตกต่างกันไปตามวัตถุประสงค์ของการรักษาและช่วงเวลาการให้ยา [7, 19]
