Эдестин является основным запасным белком семян конопли и часто рассматривается как источник легкоусвояемого белка и биоактивных пептидов после ферментативного гидролиза или желудочно-кишечного пищеварения[1–5]. В данном обзоре синтезируются имеющиеся данные в рамках механистических аспектов, имеющих отношение к сосудистой биологии, с акцентом на потенциальное (прямое или косвенное) применение в флебологии (заболевания вен). Включенная в обзор литература наиболее последовательно подтверждает антигипертензивную активность посредством модуляции ренин-ангиотензиновой системы (ингибирование АПФ/ренина), антиоксидантное действие в химических анализах и анализах на клеточных моделях, модуляцию противовоспалительных путей, а также сосудистые эффекты, связанные с эндотелием и NO, с некоторыми механистическими гиполипидемическими действиями на моделях гепатоцитов[2, 4, 6–14]. Тем не менее, клинические результаты в отношении вен не продемонстрированы для эдестина или белка семян конопли в предоставленных выдержках; представленные данные клинических испытаний с явным влиянием на вены относятся вместо этого к экстракту семян конского каштана (HCSE) при симптомах хронической венозной недостаточности (ХВН), таких как боль в ногах и отек[15]. В целом, доказательная база подтверждает механистическую правдоподобность применимости в отношении вен (функция эндотелия, окислительный стресс, воспаление и гемостатические пути), но не устанавливает эдестин как доказанное флебологическое вмешательство в рамках предоставленного массива данных[1, 2, 5, 10, 15].
Обзор эдестина
Эдестин описывается как запасной белок семян конопли, преимущественно присутствующий в фракции 11S-глобулина (подобного легумину), и, как сообщается, составляет приблизительно 60–80% от общего белка семян конопли в цитируемой обзорной литературе[1, 3]. Белок семян конопли, как сообщается, богат эдестином и альбумином и описывается как «легкоусвояемый», обеспечивая при этом незаменимые аминокислоты, включая относительно высокое содержание аргинина и глутаминовой кислоты[2]. В материале обобщены оценки усвояемости in vivo, согласно которым усвояемость белка составляет 85% для цельных семян, 87% для конопляного шрота и 95% для очищенных от шелухи семян конопли[3], а в дополнительном обзорном утверждении сообщается, что усвояемость белка in vitro превышает 88%[4].
В исследованиях неоднократно показано, что обработка влияет на качество белка и функциональные свойства. Удаление шелухи описывается как процесс, снижающий или устраняющий антинутриенты, и ассоциируется с улучшением усвояемости[1]. Поведение экстракции и растворимость белков конопли сильно зависят от pH: сообщается об увеличении извлекаемости до pH 12 и наивысшей растворимости при pH 11–12, в то время как самая низкая растворимость наблюдается вблизи изоэлектрической точки при pH 4.6 (также используемой для осаждения белка при получении изолята)[16]. Для различных форм продуктов показатели усвояемости могут существенно варьироваться (например, сообщается о 98.5% для белкового изолята из ядра конопли против 87.8% для изолята из шелухи конопли)[17].
Ферментативный гидролиз имеет центральное значение для обоснования концепции «биоактивных пептидов» для эдестина и белков конопли. Условия гидролиза изменяют выход пептидов и степень гидролиза (например, выход панкреатического гидролизата составляет 43% против 16% для пептического гидролизата, а значения степени гидролиза составляют 47.5% для панкреатического против 19.7% для пептического)[18]. Профили эксклюзионной хроматографии в представленных исследованиях гидролизатов помещают многие пептиды в диапазон приблизительно 300–9,560 Да[19, 20]. Что важно для последующей физиологической обоснованности, пептидные фракции с размером менее 3 кДа использовались в экспериментах по кишечному транспорту, и авторы сообщают, что пептиды в конопляных гидролизатах способны проходить через желудочно-кишечный барьер и при этом сохранять антиоксидантную способность[5].
Методы
Этот обзор представляет собой структурированный нарративный синтез предоставленных выдержек из данных, охватывающих характеристику состава и усвояемости, анализы биоактивности пептидов in vitro, клеточные модели окислительного стресса и воспаления, животные модели сосудистой функции, животные модели гипертензии, а также ограниченные результаты по артериальному давлению и биомаркерам у людей[1, 3, 7–11, 19, 21]. Механистические домены рассматривались как отдельные кластеры данных с акцентом на конечные точки, потенциально имеющие отношение к патологии вен (окислительный стресс, воспаление, функция эндотелия / NO-сигналинг и тромбоцитарные/гемостатические процессы), в то время как клинические исходы, явно относящиеся к венам, определялись при их наличии в предоставленном материале (например, HCSE при ХВН)[10, 11, 15].
Данные по аспектам здоровья
Состав и усвояемость
В обзорах и экспериментальных исследованиях эдестин стабильно описывается как основной запасной белок семян конопли, на долю которого обычно приходится ~60–80% от общего белка семян[1, 3]. Усвояемость оценивается как высокая для различных препаратов: усвояемость in vivo составляет 85% (цельные семена), 87% (конопляный шрот) и 95% (очищенные от шелухи семян конопли), а усвояемость in vitro, согласно одному обзору, превышает 88%[3, 4]. Технологическая обработка играет существенную роль: удаление шелухи описывается как процесс, снижающий содержание антинутриентов и улучшающий использование белка и его усвояемость[1], а растворимость/извлекаемость белка демонстрирует сильную зависимость от pH, имеющую значение для получения изолятов (более высокая извлекаемость и растворимость при щелочном pH, самая низкая растворимость вблизи изоэлектрической точки pH 4.6, используемой для осаждения)[16]. Характеристика, связанная с гидролизом, дополнительно указывает на то, что различные ферментные системы генерируют разный выход пептидов и степени гидролиза, а пептидные смеси в анализах SEC находятся в диапазоне ~300–9,560 Да[18–20]. Работа на транспортных моделях добавляет биологической правдоподобности, сообщая, что пептиды в конопляных гидролизатах (включая фракции <3 кДа) способны проходить через желудочно-кишечный барьер и сохранять антиоксидантную способность[5].
Связь с флебологией: Прямое отношение к флебологии является косвенным, однако усвояемость и способность пептидов преодолевать модель кишечного барьера являются необходимым условием для системных сосудистых эффектов, которые могли бы (в принципе) влиять на биологию эндотелия вен[5]. Отдельно в предоставленных обзорах подчеркивается роль аргинина как предшественника оксида азота, который «расслабляет и расширяет кровеносные сосуды», что подтверждает теоретическую связь с сосудистым тонусом и функцией эндотелия, которая может иметь значение для механизмов венозных заболеваний[22].
Антигипертензивная активность и ингибирование АПФ и ренина
В многочисленных обзорах описываются антигипертензивные эффекты гидролизованных белков семян конопли, обусловленные ингибированием АПФ и ренина[2, 6], а в дополнительных утверждениях обзорного характера отмечается, что конопляные пептиды ингибируют АПФ, поддерживая регуляцию артериального давления, и что пищеварение может приводить к образованию антигипертензивных биоактивных пептидов[1, 4]. Исследования пептидов и фракций in vitro дают оценки активности пептидов с ингибирующим АПФ действием, полученных из эдестина: для пептидов GVLY, LGV и RVR сообщаются значения АПФ , , и , причем эти пептиды явно описываются как образующиеся в результате гидролиза эдестина; напротив, IEE описывается как практически неактивный (ингибирование на 20.5% при наибольшей из тестируемых концентраций)[23]. Дополнительные работы in vitro сообщают об ингибировании АПФ пептидными смесями при фиксированной концентрации 1 мг/л (57.5% для S, 15.7% для M и 32.4% для T)[24], а фракционирование/гидролиз побочных продуктов белка конопли, как сообщается, увеличивает ингибирующую АПФ активность (например, гидролизат с использованием Алкалазы со значением 80 мг/л и ультрафильтрованные фракции около 72 мг/л в цитируемом исследовании)[25]. Сообщается, что фракционирование панкреатического гидролизата позволяет получить фракцию с 84.9% ингибированием АПФ при 1.0 мг/мл и , тогда как нефракционированный гидролизат обеспечивал 44.8% ингибирования АПФ при 1.1 мг/мл[26].
Данные in vivo включают результаты на крысах со спонтанной гипертензией, обобщенные в обзорах как снижение артериального давления и уменьшение активности АПФ в плазме после введения гидролизата белка семян конопли[7], наряду с сообщаемым снижением концентрации ренина в плазме и активности АПФ при скармливании белка семян конопли в цитируемых доклинических обзорах[27]. Клинические данные на людях в предоставленных выдержках включают описанное двойное слепое рандомизированное перекрестное исследование с участием 35 взрослых с легкой гипертензией, оценивающее белки и пептиды семян конопли[28], а сообщаемые результаты показывают, что прием как белков, так и пептидов семян конопли снижал 24-часовое систолическое и диастолическое артериальное давление и уменьшал активность АПФ в плазме, с дополнительными изменениями, включая биомаркеры, связанные с NO, в цитируемом отчете[8, 28].
Связь с флебологией: Флебологическая связь носит скорее около-механистический, чем основанный на венозных конечных точках характер, поскольку в представленных данных акцент делается на модуляции АПФ/ренина и связанных с ними изменениях NO, а не на таких исходах, как симптомы ХВН или венозная гемодинамика[2, 4, 7, 8]. В том же отчете об исследовании гипертензии у людей отмечается, что оба вида лечения снижали активность АПФ и ренина и повышали уровень NO в плазме по сравнению с казеином, что имеет отношение к функции эндотелия и сосудистому тонусу, способным потенциально влиять на патофизиологию вен[8].
Антиоксидантные эффекты
Антиоксидантная активность в предоставленных данных подтверждается главным образом химическими анализами in vitro и клеточными моделями окислительного стресса. В одном исследовании сообщается о статистически значимом различии, указывающем на то, что гидролизаты обладают более высокой антиоксидантной активностью, чем белки[29], а в другом отчете описывается «мощная прямая антиоксидантная активность» конопляных гидролизатов, оценленная с помощью тестов DPPH, TEAC, FRAP и ORAC[9]. Параметры гидролиза имеют важное значение: самая высокая антиоксидантная активность зарегистрирована для образцов с наибольшей степенью гидролиза (9%), причем гидролизаты на основе панкреатина демонстрируют более сильные антиоксидантные свойства по сравнению с гидролизатами на основе алкалазы согласно результатам сравнения[30]. На моделях окислительного стресса HepG2 пептиды H2 и H3, как сообщается, уменьшают количество АФК, перекисное окисление липидов и продукцию NO, а также модулируют пути Nrf-2 и iNOS при стимуляции[10], а конкретный пептид H3 (IGFLIIWV) описывается как обеспечивающий антиоксидантную активность посредством модуляции Nrf-2/iNOS со снижением уровня АФК, NO и перекисного окисления липидов, индуцированных -[31]. Изменения антиоксидантной защиты in vivo также зарегистрированы у крыс со спонтанной гипертензией, у которых включение в рацион препарата на основе конопли (HMH) приводило к увеличению уровня СОД и каталазы в плазме и снижению уровня ТРх[32]. Особенности структуры и активности обсуждаются в литературе по гидролизатам, включая утверждение о том, что С-концевой остаток тирозина в малых пептидах (AY, VY, TY и LLY) имеет ключевое значение для антиоксидантной активности[25].
Связь с флебологией: Флебологическая значимость является косвенной, но биологически правдоподобной, поскольку венозные нарушения связаны с эндотелиальной дисфункцией и окислительным стрессом, а несколько пептидов конопляного происхождения снижают уровень АФК и перекисного окисления липидов, одновременно модулируя пути Nrf-2/iNOS в моделях клеточного стресса[10, 31]. Дополнительный механистический контекст обеспечивается утверждением из обзора о том, что индукция HO-1 защищает от эндотелиальной дисфункции и окислительного стресса, что позиционирует антиоксидантные пути как важные для сосудистой системы, даже если венозные конечные точки не измерялись в этих выдержках[22].
Противовоспалительные и иммуномодулирующие эффекты
Данные о противовоспалительном действии в предоставленных выдержках в значительной степени основаны на исследованиях на клеточных моделях и обзорах биоактивных свойств белка конопли. В одном из обзоров отмечается, что белок конопли содержит биоактивные пептиды, высвобождаемые в ходе гидролиза, которые обладают противовоспалительной активностью наряду с антиоксидантной и антигипертензивной активностью[4], а в другом обзоре отмечаются противовоспалительные свойства конопляных пептидов посредством модуляции ключевых клеточных путей[4]. В модели клеток BV-2, стимулированных липополисахаридами (ЛПС), воздействие ЛПС приводило к увеличению экспрессии мРНК, связанной с инфламмасомами (Asc), по сравнению с нелечеными контрольными образцами, что указывает на воспалительную активацию в данной системе[11]. В том же исследовании сообщается о поляризации в сторону противовоспалительного фенотипа M2 на клеточной модели и описывается снижение экспрессии при обработке препаратами, включая гидролизаты, а также увеличение маркера M2 (Arg1) после сравнения конкретных видов обработки в результатах со ссылкой на рисунки[11]. В веб-источнике, не прошедшем рецензирование, указано, что эдестин исследуется на предмет потенциальных противовоспалительных и иммуномодулирующих свойств, что согласуется с более широкой концепцией противовоспалительного действия, но не является доказательством клинической эффективности[33].
Связь с флебологией: Данные доказательства тесно связаны с механизмами флебологии, поскольку заболевания вен связаны с воспалительной активацией и эндотелиальной дисфункцией, а результаты на предоставленных клеточных моделях указывают на противовоспалительную поляризацию и модуляцию экспрессии воспалительных генов в системах, стимулированных ЛПС[11]. Тем не менее, в предоставленных выдержках не приводятся клинические конечные точки в отношении вен для эдестина / белка семян конопли в этой области, поэтому связь с флебологией остается гипотетической, а не продемонстрированной с точки зрения эффективности[33].
Эндотелиальная и сосудистая функция
Данные по сосудистой физиологии животных на крысах линии Цукер с ожирением показывают, что семена конопли улучшают эндотелий-зависимое расслабление: ослабленная реакция расслабления, индуцированная ацетилхолином, улучшалась под действием семян конопли, но не масла семян конопли, а индуцированная ацетилхолином релаксация усиливалась в 1,21 раза под действием семян конопли (HS), но не конопляного масла (HO) в цитируемом анализе[14, 21]. В рамках того же экспериментального исследования также сообщается об изменениях сосудистой реактивности, включая усиление сокращения, индуцированного норадреналином, в группах HO и HS, а также о сдвигах в реакциях расслабления на модуляторы калиевых каналов (реакция на пинацидил сместилась вправо; реакция на NS1619 заметно возросла как при применении HO, так и HS)[14, 21]. Механистический контекст в предоставленных обзорах подчеркивает, что аргинин является предшественником NO и что NO расслабляет и расширяет кровеносные сосуды, подтверждая связь на уровне путей между питательным составом конопли и эндотелиальной функцией[7]. В исследовании гипертонии у людей потребление HSP+ увеличивало уровень NO в плазме по сравнению с казеином, а HSP (по сравнению с казеином) снижало активность АПФ и концентрацию ренина в плазме и повышало концентрацию NO в плазме, согласовывая изменения эндотелиальных биомаркеров с модуляцией РААС[8].
Связь с флебологией: Заболевания вен имеют общие патофизиологические признаки с более широкой эндотелиальной дисфункцией и измененной вазоактивной сигнализацией, а представленные данные демонстрируют увеличение биомаркеров, связанных с NO, и улучшение эндотелий-зависимой релаксации на животных моделях, что имеет механистическое значение, даже несмотря на то, что специфические для вен исходы не измеряются в этих выдержках[8, 14, 21]. Дополнительный контекст эндотелиальной активации исходит из обзора, в котором отмечается, что β-ситостерин может снижать уровень молекул адгезии эндотелия (VCAM-1 и ICAM-1) в экспериментальных моделях, что имеет отношение к механизмам эндотелиального воспаления, потенциально общим для артериальных и венозных заболеваний[6].
Гиполипидемические и липид-регулирующие механизмы
Наиболее убедительные гиполипидемические данные в предоставленном наборе носят механистический и клеточный характер. Многочисленные исследования in vitro сообщают о дозозависимом ингибировании активности ГМГ-КоА-редуктазы (HMGCoAR) пептидными препаратами конопляного происхождения, включая количественные значения ингибирования вплоть до 80,0% ингибирования при 1,0 мг/мл в одном исследовании[12, 34]. Дополнительные механистические выводы сообщают об усилении экспрессии SREBP2 (зрелая форма), увеличении фосфорилирования AMPK, увеличении поглощения ЛПНП и увеличении уровня белка LDLR после обработки пептидами конопли на моделях гепатоцитов[13, 35]. Сообщается, что специфический пептид H3 ингибирует HMGCoAR, а также увеличивает содержание зрелого SREBP-2 и локализованных на мембране белков LDLR с соответствующим увеличением функционального поглощения ЛПНП клетками HepG2[36]. Данные о липидных исходах in vivo неоднозначны в исследованиях на животных и людях, включая снижение общего холестерина и ЛПВП (без изменения ТГ) в одном сравнении на крысах и снижение ЛПВП и ТГ при применении конопляного масла в другом, а также клиническое исследование на людях, в котором не сообщалось о значительных изменениях плазменных ОХ, ХС-ЛПВП, ХС-ЛПНП или ТГ после вмешательства с использованием семян конопли, но сообщалось о снижении соотношения ОХ к ХС-ЛПВП в другом контексте добавления масел[14, 37].
Связь с флебологией: Регуляция липидов может иметь отношение к активации эндотелия и воспалению, а предоставленные данные включают заявление в обзоре о том, что соединения, подобные фитостеринам, могут конкурировать с холестерином за всасывание и что β-ситостерин снижает экспрессию молекул адгезии эндотелия в экспериментальных моделях, предлагая механистический мостик через пути эндотелиального воспаления, а не через венозные конечные точки[6, 7]. Тем не менее, предоставленные гиполипидемические данные напрямую не измеряют венозные клинические исходы или конечные точки венозного тромбоза, поэтому релевантность для флебологии в этом наборе данных остается косвенной[37].
Антитромботические и тромбоцитарные данные
Данные о влиянии на тромбоциты и тромбообразование в предоставленных выдержках неоднозначны и, судя по всему, зависят от компонентов. В обзоре отмечаются противоречивые данные на животных в отношении влияния семян конопли на агрегацию тромбоцитов и тромбоз[6]. В том же обзоре это противопоставляется гемину (описываемому как компонент семян конопли), который индуцирует активацию тромбоцитов и тромбоз, в том числе через сигнализацию CLEC-2 в тромбоцитах, с сопутствующими маркерами активации, такими как повышение уровня P-селектина, активация GPIIb/IIIa и экспонирование фосфатидилсерина[6]. В моделях с употреблением с пищей в одном отчете описывается, что добавление семян конопли в рацион крыс увеличивало общее количество ПНЖК в плазме и значительно ингибировало агрегацию тромбоцитов с более низкой скоростью агрегации[37], в то время как в другой модели гиперхолестеринемии у кроликов сообщается о нормализации значений агрегации тромбоцитов при добавлении 10% семян конопли, что отчасти объясняется увеличением содержания гамма-линоленовой кислоты в плазме[37]. Напротив, в отчете об исследовании с участием здоровых людей не было обнаружено изменений агрегации тромбоцитов, стимулированной коллагеном или тромбином, при добавлении в рацион масла семян конопли[37].
Связь с флебологией: Риск венозного тромбоза имеет отношение к флебологии, но имеющиеся данные не доказывают четкого чистого антитромботического эффекта белков семян конопли или пептидов, полученных из эдестина, в различных контекстах, учитывая зарегистрированные противоречия и наличие протромбоцитарных механизмов для гемина[6]. Данные об ингибировании / нормализации при диете на моделях животных предполагают возможные антиагрегантные эффекты употребления семян конопли при определенных условиях, в то время как результат отсутствия изменений агрегации у здоровых людей и протромботический механизм гемина подчеркивают неопределенность и важность характеристики конкретных фракций для любого применения, связанного с венозным тромбозом[37].
Венозные исходы и флебология
Данные о клинических исходах со стороны вен, явно приведенные в выдержках, относятся к экстракту семян конского каштана (HCSE), а не к эдестину или белку семян конопли. Цитируемые данные сообщают об улучшении признаков и симптомов, связанных с ХВН, при применении HCSE по сравнению с плацебо[15], включая зарегистрированное значительное уменьшение боли в ногах и уменьшение отеков в ходе многочисленных испытаний (включая четыре испытания со статистически значимым уменьшением отеков), а также уменьшение окружности щиколотки и икроножной мышцы в ряде исследований[15]. В том же источнике побочные эффекты описываются как обычно легкие и редкие, и делается вывод, что данные свидетельствуют об эффективности и безопасности HCSE при кратковременном лечении ХВН[15].
Связь с флебологией: Эти результаты применения HCSE служат примером того, как выглядят прямые конечные точки во флебологии в контролируемых клинических исследованиях (боль, отек и окружность конечностей), но не являются доказательством эффективности самого эдестина[15]. Напротив, данные по эдестину / белку семян конопли в предоставленном наборе подчеркивают механизмы, смежные с сосудистыми (ингибирование АПФ/ренина, изменения уровня NO, антиоксидантная и противовоспалительная активность), которые могут послужить основанием для проверки гипотез, ориентированных на вены, а не подтверждать клиническое применение при заболеваниях вен в настоящее время[2, 8, 10, 11].
Другие данные, имеющие значение для здоровья
Несколько дополнительных выводов подтверждают широкую кардиометаболическую обоснованность без предоставления клинических конечных точек в отношении вен. В обзорной статье ферментативные гидролизаты семян конопли описываются как эффективные антиоксидантные и антигипертензивные агенты в тестах in vitro и in vivo[2]. Структурная характеристика описывает эдестин как гексамер, состоящий из кислых и основных субъединиц, связанных дисульфидными связями, и сообщает соотношение Arg/Lys для эдестинов (5,27, 5,32 и 4,00), которое выше, чем у сои или казеина, что, как предполагается, подтверждает создание пищевых формул, способствующих улучшению здоровья сердечно-сосудистой системы[38]. Экстракт белка ферментированных семян конопли ингибировал пролиферацию клеток HCT116 со статистической значимостью, и авторы объясняют этот эффект образованием биоактивных пептидов из эдестина[39]. Данные также содержат явные предостережения относительно трансляции: в отношении пептидов отмечается, что биодоступность некоторых пептидов подтверждена у людей или крыс, но указывается, что необходимы исследования in vivo для понимания физиологической значимости[40].
Связь с флебологией: Эти дополнительные данные подтверждают механистическую обоснованность главным образом через сердечно-сосудистые механизмы и пути окислительного стресса, а не через прямые конечные точки для вен, и поэтому функционируют прежде всего как обоснование для целенаправленных исследований вен, а не как клиническое руководство во флебологии[2, 38, 40].
Обобщение данных во флебологии
Предоставленные данные свидетельствуют о том, что клинические исходы со стороны вен могут быть улучшены с помощью некоторых вмешательств, не содержащих эдестин (например, HCSE улучшает симптомы ХВН, включая боль в ногах и отек, и подтверждает вывод об эффективности и кратковременной безопасности при целенаправленном применении при заболеваниях вен)[15]. Для сравнения, данные по эдестину / белку семян конопли в предоставленных выдержках сосредоточены на механистических областях, которые могут иметь реальное значение для заболеваний вен, в частности на ингибировании АПФ/ренина с изменением артериального давления и биомаркеров, эндотелиальной сигнализации, ассоциированной с NO, а также на модуляции окислительного стресса и воспалительных путей в клеточных моделях[2, 7, 8, 10, 11].
Для наглядности механистической связи данные включают (i) обоснование антигипертензивного действия за счет ингибирования АПФ/ренина и связанных с ним эффектов на артериальное давление в исследованиях на животных и людях[2, 7, 8, 28], (ii) увеличение уровня NO, сопровождающее вмешательства с белковыми продуктами конопли у людей, и улучшение эндотелий-зависимой релаксации в сосудистых исследованиях на животных с семенами конопли[8, 14, 21], а также (iii) антиоксидантные и противовоспалительные клеточные эффекты, включая снижение уровня активных форм кислорода (АФК), перекисного окисления липидов и модуляцию паттернов Nrf-2/iNOS и воспалительной поляризации при стрессовой стимуляции[10, 11, 31]. Эти конвергентные механизмы согласуются с общими путями сосудистой и эндотелиальной дисфункции, которые в принципе могут иметь отношение к воспалению венозной стенки, активации венозного эндотелия и риску тромбоза, оставаясь при этом неизученными в качестве клинической эффективности в отношении вен в предоставленных данных, сфокусированных на эдестине[6, 10].
Обсуждение
Во всех механистических доменах наиболее внутренне согласованные сигналы для богатых эдестином протеинов конопли заключаются в том, что пищеварение и ферментативный гидролиз генерируют пептиды с измеримой биоактивностью и что эти пептиды способны сохранять функцию in vitro и (в ограниченных случаях) после моделирования транспорта через кишечный барьер[5, 18, 19, 29]. Ингибирование АПФ поддерживается на нескольких уровнях, включая эдестин-производные пептидные последовательности с количественно определенными значениями, ингибирование на уровне фракций, а также изменения биомаркеров артериального давления и ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС) in vivo и в небольшом рандомизированном перекрестном исследовании гипертонии[8, 23, 26]. Антиоксидантные и противовоспалительные сигналы подтверждаются главным образом химическими анализами и клеточными моделями, в которых пептидные фракции снижают показатели стресса, связанные с активными формами кислорода и оксидом азота, и модулируют Nrf-2/iNOS и воспалительные фенотипы в стимулированных условиях[9–11, 31]. Данные об эндотелиальной функции включают улучшение опосредованной ацетилхолином релаксации при применении семян конопли в животной модели и увеличение уровня оксида азота в исследованиях с участием людей, что в совокупности свидетельствует о сосудистой биоактивности, выходящей за рамки одного лишь снижения артериального давления[8, 14, 21].
Для флебологии ключевым интерпретационным ограничением является то, что представленные прямые венозные клинические данные относятся к сухому экстракту конского каштана (HCSE), а не к эдестину, а представленные данные по белку эдестина/семян конопли носят преимущественно механистический или кардиометаболический характер, а не характер испытаний венозных конечных точек[2, 15]. Следовательно, любое применение эдестина в флебологии должно быть сформулировано как гипотетико-ориентированное: нацеливание на венозные конечные точки, аналогичные тем, которые используются в исследованиях хронической венозной недостаточности (боль, отек, окружность конечностей и другие объективные показатели), с одновременным использованием механистических биомаркеров, уже применяемых в литературе по гипертонии и эндотелию (АПФ, ренин и плазменный оксид азота), а также конечных точек окислительного стресса в соответствующих типах сосудистых клеток[8, 10, 15].
Ограничения
Центральным ограничением предоставленных данных является то, что значительная часть работы по биоактивности является доклинической или механистической (химические анализы, клеточные модели, исследования фракционирования пептидов), что ограничивает клинические выводы в отношении венозных заболеваний[9, 10, 25]. Даже там, где существуют клинические данные с участием людей, они сосредоточены на гипертонии и биомаркерах (суточное артериальное давление, активность АПФ/ренина и оксид азота), а не на венозных конечных точках, что ограничивает прямую трансляционную значимость для флебологии[8]. Набор данных также подчеркивает неопределенность в отношении физиологической значимости и трансляции пептидной биоактивности с явными заявлениями о том, что для подтверждения предполагаемой биоактивности необходимы исследования in vivo, несмотря на определенные доказательства биодоступности у людей или крыс[40]. Наконец, данные, касающиеся тромбоцитов и тромбоза, являются разнонаправленными и включают протромботические механизмы, специфичные для компонентов (гемин), наряду с результатами исследований рациона питания животных и человека, которые варьируются от ингибирования агрегации до ее отсутствия, что усложняет выводы в отношении риска венозного тромбоза без проведения дополнительных клинических испытаний, специфичных для конкретных фракций[6, 37].
Выводы и приоритеты исследований
Представленные данные подтверждают, что богатый эдестином белок семян конопли является высокоусваиваемым источником белка, способным генерировать пептидные смеси, способные проходить через кишечный барьер в модельной системе, и обладающим измеримой биоактивностью in vitro и in vivo, в частности ингибированием АПФ, антиоксидантной активностью и воспалительной модуляцией[1–3, 5, 11, 29]. Наиболее клинически близкие представленные данные касаются снижения артериального давления и изменений биомаркеров РААС/оксида азота при легкой форме гипертонии, а не венозных исходов, в то время как прямая эффективность в отношении вен в предоставленных выдержках продемонстрирована для HCSE при хронической венозной недостаточности, а не для эдестина[8, 15].
Будущие направления исследований, которые прямо обусловлены предоставленными данными, включают следующее, каждое из которых предназначено для преобразования механистической правдоподобности в доказательства, имеющие значение для вен:
- Клинические испытания венозных конечных точек при хронической венозной недостаточности с использованием исходов, аналогичных литературе по HCSE (боль в ногах, отек и окружность конечностей), но с тестированием богатого эдестином белка семян конопли или определенных пептидных препаратов[15].
- Модели венозного эндотелия и клеток венозной стенки, оценивающие конечные точки окислительного стресса и воспалительного сигналинга, которые уже продемонстрировали модуляцию в других клеточных системах (например, активные формы кислорода, перекисное окисление липидов, показатели, связанные с Nrf-2/iNOS, и паттерны воспалительной поляризации при стрессовой стимуляции), с использованием пептидов с продемонстрированной клеточной активностью, таких как H3 (IGFLIIWV)[10, 11, 31].
- Фармакокинетические исследования и исследования биодоступности, определяющие, какие пептиды, полученные из эдестина, достигают кровотока после приема внутрь, основываясь на данных о кишечном транспорте и явном призыве к валидации физиологической значимости in vivo[5, 40].
- Механистические исследования венозной гемодинамики, объединяющие панели биомаркеров РААС/оксида азота (АПФ, ренин, плазменный оксид азота), уже используемые в работе по гипертонии, чтобы проверить, изменяются ли эти пути у людей с венозными заболеваниями, получающих препараты, полученные из эдестина[8].
- Оценки безопасности в популяциях с риском венозного тромбоза с явным учетом смешанных данных по тромбоцитам и протромботических механизмов, специфичных для компонентов, таких как опосредованная гемином активация тромбоцитов, описанная в обзорной литературе[6].
