Johdon tiivistelmä
Käytettävissä olevassa kirjallisuudessa fisetin ja quercetin esiintyvät toistuvasti bioaktiivisina flavonoideina, joiden käytännön suorituskykyä rajoittaa formulaatiosta johtuva vähäinen altistus; useat lähteet kuvaavat nimenomaisesti konventionaalisten valmisteiden tai liuosten/suspensioiden heikkoa vesiliukoisuutta ja matalaa mitattavissa olevaa hyötyosuutta.[1–4] Useita nano- ja lipidipohjaisia menetelmiä (liposomit, nanoliposomit, polymeeriset misellit, nanosuspensiot, nanoemulsiot, nanokokleaatit, SNEDDS) esitetään käytännön strategioina systeemisen altistuksen ja/tai imeytymiskinetiikan parantamiseksi, usein huomattavilla määrällisillä lisäyksillä AUC-arvoissa tai suhteellisessa hyötyosuudessa.[3–9] Aineiston vahvin ihmisillä havaittu farmakokineettinen vaste saavutettiin hybridi-miselli-hydrogeelissä-fisetinjärjestelmällä (FF-20), joka suurensi fisetin AUC0–12h-arvoa 26.9-kertaisesti ja Cmax-arvoa 9.97 ng/mL:sta 238.2 ng/mL:aan verrattuna formulaatiottomaan vertailuvalmisteeseen, samalla pidentäen sitä aikajaksoa, jona fisetin oli määritettävissä plasmasta.[4]
Senolyyttinen perusta
Tässä aineistossa fisetin määritellään useissa lähteissä nimenomaisesti senoterapeuttiseksi tai senolyyttiseksi flavonoidiksi, mukaan lukien tutkimus, jossa fisetin valittiin erityisesti ”hyvin tutkituksi senoterapeuttiseksi lääkeaineeksi” liposomeissa testausta varten, sekä katsauslausunto, jonka mukaan fisetin-yhdisteellä on ”senolyyttisiä vaikutuksia”.[10, 11] Mukana olevissa otteissa viitatut prekliiniset in vivo -tulokset osoittavat, että kymmenestä in vivo testatusta luonnollisesta flavonoidista fisetin raportoitiin olevan ”tehokkain senolyyttinen yhdiste”, joka vähensi senesenssimarkkereita progeroidisilla ja vanhoilla hiirillä.[12] Aineiston ainoassa suorassa senesenssimallikokeessa (doxorubicin-indusoitu senesenssi A549- ja WI38-soluissa) ei kuitenkaan havaittu valikoivaa senolyysiä vapaalle fisetin-yhdisteelle tai fisetin-kuormitetuille liposomeille elinkykyisyysmäärityksissä, vaikka SASP-sytokiinien IL-6 ja IL-8 senomorfista modulaatiota havaittiinkin edelleen ELISA-menetelmällä.[10]
Liposomaaliset kapselointistrategiat
Liposomimuotoista fisetin-valmistetta edustavat useat valmistus- ja karakterisointimenetelmät, mukaan lukien ohutkalvomenetelmä (thin-layer / thin-film) määritetyillä fosfolipideillä ja kolesterolilla, sekä ohutkalvohaihdutukseen perustuva nanoliposomialusta, jossa on valinnainen hyaluronic acid -päällyste stabiiliuden parantamiseksi ja ruoansulatusvaiheen misellimuodostuksen optimoimiseksi.[10, 13] Eräässä in vitro -senesenssitutkimuksessa liposomit valmistettiin sekoittamalla DOPC-, DSPE- ja kolesteroli-molekyylejä orgaaniseen liuottimeen, muodostamalla lipidikalvo, rehydratoimalla se HEPES-puskurissa ja ekstrudoimalla polykarbonaattikalvojen läpi aina 100 nm kokoon asti yhtenäisten liposomien saamiseksi.[10] Tyhjien liposomien Z-keskiarvo oli 115.9 ± 0.9 nm (PDI 0.155 ± 0.004) ja ζ-potentiaali −20.3 ± 0.6 mV, kun taas fisetin-kapselointi pienensi koon arvoon 95.1 ± 1.0 nm (PDI 0.178 ± 0.008) ja muutti ζ-potentiaalin arvoon −11.6 ± 1.2 mV, kapselointitehokkuuden ollessa 13.68%.[10]
Erillinen nanoliposomijärjestelmä käytti lecithin- ja fisetin-yhdistettä massasuhteessa 25:1 fisetin-pitoisuuden ollessa 0.8 mg/mL. Järjestelmä valmistettiin ohutkalvohaihdutuksella ja ultraäänikäsittelyllä (2 min teholla 40 W/cm²), ja se tuotti ~80 nm kokoisia suorakaiteen muotoisia nanoliposomeja, joiden PDI oli noin 0.3.[13] Hyaluronic acid (HA) -päällyste valmistettiin liuottamalla HA-molekyyliä fosfaattipuskuriin ja sekoittamalla se nanoliposomien kanssa tilavuussuhteessa 1:10 yön yli sekoittaen. HA-molekyylipaino vaikutti kapselointitehokkuuteen (90–95% painoilla 3/35/90–100 kDa, lasken 79%:iin painolla 150–250 kDa ja 74%:iin painolla 1000–1500 kDa).[13]
Polymeeriset ja itseorganisoituvat misellit
Polymeeriset misellit kuvataan aineistossa nimenomaisesti nanomittakaavan ydin-kuori-rakenteina (core/shell assemblies), joita muodostavat amfifiiliset lohkokopolymeerit, ja useat quercetin-misellijärjestelmät tarjoavat määrällisiä parannuksia oraaliseen PK-profiiliin.[2, 5, 7] Rotilla MPEG-b-PLLA-quercetin-misellin (valmistettu ohutkalvohydraatiolla) hiukkaskoko oli 88.5 ± 2.6 nm, PDI 0.13 ± 0.04, kapselointitehokkuus 82.5 ± 2.1% ja zetapotentiaali −8.72 ± 1.03 mV.[7] Tämä miselli kasvatti AUC0–∞-arvoa vetisestä suspensiosta (4633.71 ± 557.67 h·ng/mL) arvoon 41677.10 ± 4573.95 h·ng/mL, ja sen raportoitiin nimenomaisesti lisäävän suhteellista oraalista hyötyosuutta 9-kertaisesti, korkeammalla Cmax-arvolla (1920.83 ± 250.14 ng/mL vs 628.67 ± 64.66 ng/mL) ja viivästyneellä Tmax-arvolla (7.3 ± 1.6 h vs 3.0 ± 1.1 h).[7]
Toisessa quercetin-misellimenetelmässä käytettiin Soluplus-misellejä, jotka valmistettiin modifioidulla kalvodispersiolla (Soluplus plus F127). Siinä 7%:n teoreettinen lääkeainekuormitus tuotti hiukkaskooksi 79.00 ± 2.24 nm, PDI-arvoksi 0.154 ± 0.044, kapselointitehokkuudeksi 95.91% ± 4.05% ja zetapotentiaaliksi −17.10 ± 2.30 mV.[2] Beagle-koirilla nämä misellit pidensivät quercetin-yhdisteen havaittavuutta 24 tunnista (vapaa lääkeaine) 48 tuntiin (miselli) ja nostivat Cmax-arvoa 5.24 μg·mL−1:stä 7.56 μg·mL−1:iin raportoiden puoliintumisajan, joka oli 2.19-kertaisesti pidempi kuin puhtaalla quercetin-yhdisteellä.[2]
Kiinteät lipidi- ja nanohiukkasalustat
Misellien ja liposomien lisäksi aineisto sisältää useita nanohiukkasalustoja, jotka kattavat polymeeriset nanohiukkaset (PLGA), proteiininanohiukkaset (BSA-pohjaiset), chitosan-ionigeeliytysnanohiukkaset sekä nanosuspensiot/nanokiteet, joista jokaisesta on esitetty yksityiskohtaiset koko- ja kapselointitiedot.[1, 14–16] Fisetin-yhdisteelle kehitettyjä PLGA-nanohiukkasia arvioitiin laskimonsisäistä antoa silmällä pitäen, ja erään esimerkkiformulaation (NP4) keskimääräiseksi hiukkaskooksi raportoitiin ~330 nm, ζ-potentiaaliksi −7.2 mV, PDI-arvoksi 0.25, kapselointitehokkuudeksi 83.58% ja lääkeainekuormitukseksi 13.93%.[17] Toinen fisetin-yhdisteelle kehitetty PLGA-nanohiukkasjärjestelmä (FST-NP) saavutti keskimääräisen koon 187.9 nm, PDI-arvon 0.121, ζ-potentiaalin −29.2 mV ja kapselointitehokkuuden 79.3%. Se tuotti 4.9×, 3.2× ja 2.3× suuremman läpäisevyyden kuin suspensio käännetyn suolen mallissa (everted gut sac -malli) pohjukaissuolen/tyhjäsuolen/kiemuratsuolen alueella.[15]
Folaattiin kohdennettujen fisetin-nanohiukkasten (FFANPs) raportoitiin olevan monodispersejä pallomaisia 150 nm hiukkasia, joiden PDI oli 0.117, kapselointitehokkuus korkea (92.36% ± 3.84) ja kuormituskapasiteetti 8.39% ± 3.04, mikä tukee reseptoriin kohdentavaa mallia pikemminkin kuin suun kautta otettavaa altistusmallia tässä otteessa.[14] Chitosan/TPP-ionigeeliytetyillä fisetin-nanohiukkasilla (FNPs) keskimääräinen koko oli 363.1 ± 17.2 nm, ζ-potentiaali +17.7 ± 0.1 mV, kapselointitehokkuus 78.79 ± 7.7% ja kuormituskapasiteetti 37.46 ± 6.6%.[1]
Itseemulgoituvat ja nanoemulsiojärjestelmät
Aineisto kuvaa sekä SNEDDS-konsepteja määritelmäsivulla että konkreettisia nanoemulsiojärjestelmiä in vivo -PK-tuloksilla fisetin-yhdisteelle, korostaen formulaatiolähtöistä imeytymiskinetiikkaa ja annostehokkuutta tautimalleissa.[5, 6] Fisetin-yhdisteelle optimoitu nanoemulsioformulaatio (nanoemulsion 9) koostui seuraavista aineista: Miglyol 812 N (10%), Labrasol (10%), Tween 80 (2.5%), Lipoid E80 (1.2%), glycerol (2.25%), NaOH (0.1N) pH-arvoon 7 ja vettä 100 %:iin saakka. Miglyol-pitoisen valmisteen nanohiukkasten halkaisijaksi ilmoitettiin 146 ± 3 nm ja PDI-arvoksi erittäin matala 0.015.[6] Saman nanoemulsioperheen pisarahalkaisijaksi karakterisoitiin 153 ± 2 nm, negatiiviseksi ζ-potentiaaliksi −28.4 ± 0.6 mV ja PDI-arvoksi 0.129. Nanoemulsion raportoitiin olevan stabiili 4 °C lämpötilassa 30 päivän ajan, ja faasierottumista havaittiin 20 °C lämpötilassa.[6]
Farmakokineettisesti tämän fisetin-nanoemulsion laskimonsisäisen annostelun (13 mg/kg) raportoitiin osoittavan, ettei systeemisessä altistuksessa ollut merkittävää eroa verrattuna vapaaseen fisetin-yhdisteeseen, kun taas vatsakalvonsisäinen (intraperitonaalinen) annostelu tuotti 24-kertaisen lisäyksen suhteellisessa hyötyosuudessa verrattuna vapaaseen fisetin-yhdisteeseen. Tämän katsottiin johtuvan nopeammasta imeytymisestä, mikä heijastui lyhyempänä keskimääräisenä imeytymisaikana (MAT 1.97 h vs 5.98 h).[6]
Quercetin-yhdisteen osalta eräässä SNEDDS-tutkimuksessa kuvattiin optimoitu nanoemulgoituva formulaatio, jossa käytettiin triacetin-ainetta öljyfaasina, Tween 20 -ainetta pinta-aktiivisena aineena ja ethanol-ainetta apu-pinta-aktiivisena aineena. Tämän NE4-hiukkaskoko oli 11.96 nm ja raportoitu lääkeainepitoisuus korkea (~97.98% – 100.88%).[18]
Määrälliset hyötyosuuden lisäykset
Tässä lainattu kirjallisuus tukee johdonmukaista mallia: nano- ja lipidipohjaiset annostelujärjestelmät voivat moninkertaistaa altistuksen verrattuna perinteisiin liuoksiin, suspensioihin tai formuloimattomiin vertailuvalmisteisiin. Nämä moninkertaiset muutokset on raportoitu suoraan useissa itsenäisissä tutkimuksissa ja katsauksissa.[3–5, 7–9] Alla oleva taulukko kokoaa raportoidut moninkertaiset lisäykset ja keskeiset PK-päätepisteet täsmälleen sellaisina kuin ne on esitetty lähteissä, käyttäen AUC-pohjaista suhteellista hyötyosuutta silloin, kun se on saatavilla.
| Flavonoidi | Järjestelmä | Malli | Keskeinen määrällinen lisäys | Raportoidut PK-yksityiskohdat |
|---|---|---|---|---|
| Fisetin | Hybridi-FENUMAT miselli-hydrogeelissä (FF-20) | Terveet vapaaehtoiset (kerta-annos) | AUC0–12h 26.9-kertaisesti korkeampi vs UF[4] | Cmax 238.2 ng/mL (FF-20) vs 9.97 ng/mL (UF); Tmax 1.24 h vs 0.88 h; t1/2 1.51 h vs 1.14 h; fisetin määritettävissä 8 h saakka vs 2 h[4] |
| Fisetin | Nanoemulsio | Hiiret (vatsakalvonsisäinen) | 24-kertaisesti korkeampi suhteellinen hyötyosuus vs vapaa fisetin[6] | Nopeampi imeytyminen (MAT 1.97 h vs 5.98 h); samankaltainen altistus vs vapaa i.v.-annostelussa (päällekkäiset käyrät; samankaltaiset Cmax/AUC/t1/2)[6] |
| Fisetin | Nanokokleaatit (katsausyhteenveto) | In vivo (antoreitiksi määritelty säädellysti vapauttava konteksti) | Hyötyosuus parani jopa 141-kertaiseksi[5] | Raportoitu säädeltynä vapautumisena valmistetusta kompleksista[5] |
| Fisetin | Liposomaalinen järjestelmä (katsausyhteenveto) | In vivo (vatsakalvonsisäinen) | Hyötyosuus parani 47-kertaiseksi[5] | Antoreitiksi määritelty vatsakalvonsisäinen injektio[5] |
| Quercetin | MPEG-b-PLLA-miselli | SD-rotat (oraalinen) | Suhteellinen oraalinen hyötyosuus 9-kertainen vs vesiliukoinen suspensio (AUC-pohjainen)[7] | AUC0–∞ 41677.10 ± 4573.95 vs 4633.71 ± 557.67 h·ng/mL; Cmax 1920.83 ± 250.14 vs 628.67 ± 64.66 ng/mL; Tmax 7.3 ± 1.6 vs 3.0 ± 1.1 h[7] |
| Quercetin | LipoMicel nestemäinen misellimatriisi | Terveet vapaaehtoiset (crossover) | 8-kertainen AUC- ja 9-kertainen Cmax-lisäys vs vapaa quercetin[8] | Cmax 182.85 ng/mL kohdassa Tmax 0.5 h; phytosomin AUC hieman korkeampi kuin LipoMicel-valmisteen samassa tutkimusraportissa[8] |
| Quercetin | Kaseiini-nanohiukkaset HP-β-CD-yhdisteellä | Wistar-rotat (oraalinen) | Suhteellinen oraalinen hyötyosuus lähellä 37% (yhdeksän kertaa korkeampi kuin vertailuliuoksella); vertailuliuoksen oraalinen hyötyosuus noin 4%[3] | Plasmamäärät havaittavissa jopa 72 h saakka Q-HPCD-NP-ryhmässä; AUC 61 μg·h/mL ~10-kertaisesti korkeampi kuin suun kautta annettavalla liuoksella[3] |
| Quercetin | Nanosuspensiot stabilointiaineilla ja metabolian estäjillä | SD-rotat (oraalinen) | Absoluuttinen hyötyosuus nousi jopa 23.58%:iin vs 3.61% vesisuspensiolla (korkein ryhmä SPC-Pip-Que-NSps)[9] | Tekstissä raportoidut AUC0–∞-lisäykset olivat 6.5× (SPC-Pip) ja 4.3× (TPGS) vs suspensio, ja AUC-arvot oli ilmoitettu[9] |
| Quercetin | Nanokide-itse-stabiloitu Pickering-emulsio | SD-rotat (oraalinen) | AUC0–t kasvoi 2.76× vs karkea jauhe ja 1.38× vs nanokiteet[19] | Tmax lyheni arvoon 1.75 ± 1.26 h vs 3.33 ± 1.63 h (karkea) ja 2.96 ± 0.17 h (NC); Cmax 6.06 μg·mL−1 (NSSPE) vs karkea jauhe (ilmoitettu suhde 2.41×)[19] |
Ensikierto- ja imeytymisrajoitukset
Vaikka aineisto ei suoraan kvantifioi maksametaboliareittejä, useat tutkimukset osoittavat toiminnallisesti, että formulaatio voi ohjata imeytymisprosessia ja sen aikataulua. Tämä ilmenee muun muassa vatsakalvonsisäisesti annostellun fisetin-nanoemulsion nopeampana imeytymisenä (lyhyempi MAT) ja ihmisillä käytetyn FF-20-valmisteen pidempään jatkuvana havaittavuutena verrattuna formulaatiottomaan vertailuvalmisteeseen.[4, 6] Quercetin-yhdisteen osalta useat suun kautta annosteltavat nanokantajat pidentävät systeemistä viipymisaikaa. Tällaisia ovat muun muassa kaseiini-nanohiukkaset, jotka ylläpitivät mitattavia plasmapitoisuuksia jopa 72 h saakka (vs 24 h ei-syklodekstriini-nanohiukkasilla), ja Soluplus-misellit, jotka pidensivät havaittavuutta koirilla 48 h saakka verrattuna vapaan lääkeaineen 24 h viipymään.[2, 3] Tulokset osoittavat myös, että nanokantajat voivat muuttaa Tmax-arvoa kumpaankin suuntaan järjestelmän rakenteesta riippuen, mistä esimerkkeinä ovat viivästynyt Tmax MPEG-b-PLLA-quercetin-miselleissä (7.3 h vs 3.0 h) ja lyhentynyt Tmax quercetin Pickering -emulsiossa (1.75 h vs 3.33 h).[7, 19]
Analyyttinen validointi
Aineisto tarjoaa kattavaa näyttöä siitä, että flavonoidi-nanoformulaatioiden määrällinen arviointi tukeutuu vahvasti nestekromatografiaan (HPLC/UPLC) ja LC-MS/MS-menetelmään, minkä lisäksi UV-Vis-absorbanssia ja fluoresenssimenetelmiä käytetään formulaation karakterisointiin ja pitoisuusmäärityksiin.[1, 4, 7, 9, 10, 13] FF-20-valmisteen ihmisen fisetin-farmakokinetiikassa fisetin ja sen metaboliitti geraldol kvantifioitiin käyttämällä UPLC-ESI-MS/MS (QTRAP) -menetelmää negatiivisen ionin MRM-tilassa acetonitrile-uuton ja suodatuksen jälkeen, ja fisetin-pitoisuus mitattiin myös validoidulla HPLC-analyysillä.[4] Rotan quercetin-misellien farmakokinetiikassa kolmoiskvadrupooli-LC-MS/MS-menetelmä kvantifioi quercetin-yhdisteen MRM-transitiolla m/z 301.1 → 151.0 kromatografisella erottelulla Agilent Eclipse-C18 -kolonnilla isokraattisella vesi/metanoli-mobiilifaasilla.[7]
Useissa formulaatiojulkaisuissa käytettiin HPLC-UV- tai HPLC-DAD-menetelmiä pitoisuus- ja vapautumis-/läpäisykokeissa, mukaan lukien fisetin-nanoemulsion kvantifiointi käänteisfaasikromatografialla (RP-HPLC) UV-detektiolla aallonpituudella 360 nm ja quercetin-kuormitettujen kaseiini-nanohiukkasten kvantifiointi HPLC-UV-DAD-menetelmällä aallonpituudella 370 nm.[3, 6] Tietyissä järjestelmissä käytettiin UV-Vis-spektrofotometriaa fisetin- tai quercetin-pitoisuuksien arviointiin (esim. fisetin aallonpituudella 364 nm chitosan-nanohiukkasille; quercetin aallonpituudella 374 nm SNEDDS-liukenemis-/lääkeainepitoisuusmäärityksissä), ja yhdessä liposomaalisessa fisetin-tutkimuksessa fisetin-pitoisuus kvantifioitiin spektrofluorometrialla heräte-/emissioaallonpituuksilla 418/486 nm.[1, 10, 18]
Senesenssi- ja tehotulokset
Suoria senesenssimallituloksia hallitsee aineistossa tällä hetkellä yksi in vitro -tutkimus, jossa testattiin fisetin-yhdistettä ja fisetin-kuormitettuja liposomeja doxorubicin-indusoiduissa senesenssimalleissa. Kyseisessä tutkimuksessa vapaa fisetin tai fisetin-kuormitetut liposomit eivät kumpikaan aiheuttaneet senesenttien solujen valikoivaa apoptoosia verrattuna ei-senesentteihin soluihin elinkykyisyysmäärityksissä.[10] Tutkimuksessa raportoitiin kuitenkin senomorfista aktiivisuutta, joka osoitettiin vähentyneenä IL-6- ja IL-8-erityksenä senesenteissä soluissa, ja sekä vapaan että liposomaalisen fisetin-yhdisteen todettiin moduloivan SASP:ia ELISA-analyysin perusteella.[10] Näitä havaintoja täydentäen otteisiin sisältyvä ulkoinen in vivo -senolyyttinen väite esittää, että fisetin raportoitiin olevan tehokkain senolyytti kymmenestä in vivo testatusta flavonoidista, vähentäen senesenssimarkkereita progeroidisilla ja vanhoilla hiirillä, joskaan mukana olevissa tiedoissa ei annettu formulaatiota koskevia yksityiskohtia.[12]
Senesenssipäätepisteiden ulkopuolella useat nanoformulaatiot osoittavat altistuksen paranemisen kanssa yhdenmukaista tehoa tautimalleissa. Esimerkiksi fisetin-nanoemulsiolla saavutettiin 53%:n kasvaintilavuuden pieneneminen annoksella 36.6 mg/kg, kun taas vastaavaan kasvun estoon vaadittiin noin 6-kertainen vapaan fisetin-yhdisteen annos (223 mg/kg) Lewisin keuhkokarsinoomaa (Lewis lung carcinoma) sairastavilla hiirillä.[6] Muita esimerkkejä ei-senesenssitehokkuudesta ovat fisetin-nanosuspensio, joka paransi muistia ja oppimista sekä alensi MAO-A-tasoja Aβ(25–35)-indusoidussa dementiassa hiirillä, ja fisetin chitosan -nanohiukkaset, jotka vähensivät tulehdussytokiinien mRNA:ta (TNF-α ja IL-6) ja lisäsivät IL-10-tasoja IL-1β-esikäsitellyissä kondrosyyteissä estäen samalla rustoon liittyvien transkriptien (Sox-9 ja COL2) vähenemistä.[1, 16]
Translationaalinen tila
Aineisto sisältää useita terveillä vapaaehtoisilla tehtyjä hyötyosuustutkimuksia sekä fisetin- että quercetin-formulaatioille, mikä tarjoaa suoraa translationaalista näyttöä altistuksen parantamista koskeville väitteille.[4, 8] Fisetin-yhdisteen osalta satunnaistetussa, kaksoissokkotetussa, crossover-tutkimuksessa 15 terveellä vapaaehtoisella verrattiin 1000 mg:n UF-annosta 1000 mg:n FF-20-annokseen (joka sisälsi 192 mg fisetin-yhdistettä) 10 päivän poishuuhtelujaksolla (washout). Tämä mahdollisti suoran koehenkilön sisäisen PK-vertailun, joka osoitti huomattavasti korkeamman AUC:n ja Cmax:n FF-20-valmisteelle sekä pidemmän ajan, jona fisetin oli mitattavissa plasmasta.[4] Quercetin-yhdisteen osalta avoimessa crossover-tutkimuksessa 12 terveellä aikuisella vapaaehtoisella arvioitiin kolmea quercetin-tuotetta, ja siinä raportoitiin LipoMicel-nestemäisen misellimatriisin saavuttavan 8-kertaisen AUC- ja 9-kertaisen Cmax-lisäyksen verrattuna vapaaseen quercetin-yhdisteeseen, Cmax-arvon ollessa 182.85 ng/mL kohdassa Tmax 0.5 h.[8]
Tiedonpuutteet ja tulevaisuuden suunnat
Esitetyn näytön puitteissa keskeinen tutkimusaukko on suun kautta otettavan hyötyosuuden parantumisen vähäinen kytkentä suoriin senesenssin poistamisen päätepisteisiin (esim. senesenttien solujen selektiivinen eliminointi), sillä ainoa tähän sisältyvä eksplisiittinen senesenssimallikoe osoitti senomorfista SASP-vähenemistä ilman senolyyttistä selektiivisyyttä sekä vapaalla fisetin-yhdisteellä että fisetin-kuormitetuilla liposomeilla.[10] Toinen puute on se, että jotkin alustat raportoivat merkittäviä parannuksia biosaavutettavuudessa tai läpäisevyydessä (esim. fisetin-nanoliposomit lisäsivät biosaavutettavuutta tasolle 88.9–92.5% verrattuna 7.2%:iin bulggiöljyssä, ja PLGA-fisetin-nanohiukkaset lisäsivät suoliston läpäisevyyttä jopa 4.9-kertaiseksi käännetyn suolen mallissa) ilman rinnakkaista in vivo systeemisen PK:n varmistusta tässä esitetyissä otteissa.[13, 15]
Käytännön tulevaisuuden suunta, johon näyttö viittaa, on formulaation karakterisoinnin tiiviimpi integrointi validoituihin bioanalyyttisiin mittauksiin. Tämä johtuu siitä, että aineisto osoittaa laajan metodologisen kirjon — aina kliinisen PK-vaiheen LC-MS/MS- ja UHPLC-HRMS-menetelmistä formulaation seulonnan kapselointi- tai liukenemismäärityksissä käytettäviin UV-Vis-analyyseihin — mikä viittaa siihen, että harmonisoidut kvantifiointistrategiat voisivat parantaa tutkimusten välistä vertailukelpoisuutta.[1, 4, 8, 18] Toinen tulevaisuuden suunta on haluttuihin imeytymisprofiileihin räätälöity formulaation valinta, sillä tutkimukset osoittavat sekä viivästyneitä että nopeutuneita Tmax-arvoja kantajatyypistä riippuen (esim. MPEG-b-PLLA-misellit viivästyttävät Tmax-arvoa vs Pickering-emulsiot lyhentävät sitä). Tämä antaa ymmärtää, että ”paras” formulaatio voi vaihdella terapeuttisen tavoitteen ja annosteluikkunan mukaan.[7, 19]
