高剪断プロセスにおける熱不安定性ロンジェビティ化合物の熱力学的安定性

高せん断製造ストレス下における熱不安定性長寿化合物の熱力学的安定性および分解速度論

Abstract

熱不安定性の長寿関連化合物およびポリフェノール系生物活性物質は、製造過程（例：高せん断混合、高圧均質化、および噴霧乾燥）において、熱、酸化、pH、および機械的ストレスが複合的に作用することが多く、これが化学的分解を加速させ、送達される力価を低下させる可能性がある。したがって、製造可能なデザインスペースを定義し、保護的な製剤戦略を導くためには、プロセスに関連した定量的な安定性パラメータが必要である。[1–3]

本統合レビューにおける手法は、以下の項目を報告している研究から抽出された定量的証拠に焦点を当てている：

• DSCおよびTGAによって評価された熱力学的/熱的転移（融解、分解開始、ガラス転移、および段階的な質量減少挙動）
• NAD⁺ precursors (NR/NRH/NMN)、stilbenoids (resveratrol関連系)、flavonoids (quercetin, fisetin, rutin/エステル体)、およびcurcuminoidsの分解速度論（疑似一次/一次モデル、Arrhenius活性化エネルギー、pH依存性、および分解率時間測定）。[4–11]

結果は、いくつかの代表的な長寿化合物が特定の物理状態において狭い熱処理ウィンドウを示すことを示唆している。Nicotinamide riboside chloride (NRCl) は 120.7 ± 0.3 °C で融解を開始し、融解後に急速な分解を示す（例：qNMRによる測定で 130 °C において 98% 分解）。一方、水溶液中での分解は疑似一次速度論に従い、pHに応じて 75.4–82.8 kJ·mol⁻¹ の活性化エネルギーを示す。[4]

trans-resveratrol の場合、分解速度論は pH および温度に強く依存し（例：半減期は pH 1.2 での 329 days から pH 10 での 3.3 minutes に減少）、錠剤マトリックス中での加速試験の補外は non-Arrhenius 的となる可能性がある。[7, 12]

高せん断単位操作は、局所的な加熱および酸化環境を誘発する可能性がある。これは、高せん断均質化において回転速度とともに出口温度が上昇し、20,000 rpm で 42.6% の ascorbic-acid 損失と一致すること、および >100 MPa におけるバルブせん断、キャビテーション、乱流を伴う高圧均質化メカニズムによって実証されている。[13, 14]

結論として、熱力学的転移データ (DSC/TGA/Tg) を速度論モデル (Arrhenius, non-Arrhenius, および等変換法) と統合し、時間–温度–せん断マップを作成して、カプセル化、amorphous solid dispersions、cyclodextrin/nanosponge システム、酸素制御、およびせん断/温度の最小化を含む緩和戦略を合理的に選択することの重要性を強調する。[15–18]

Keywords

thermolabile bioactives; degradation kinetics; Arrhenius; DSC; TGA; high-pressure homogenization; spray drying; NAD⁺ precursors

1. Introduction

長寿に関連する化合物は、ニュートラシューティカルズ、機能性食品、および高度な送達システムとして製剤化されることが増えており、加熱、酸素接触、水分活性、pH変動、および強力な機械的エネルギー入力を含む複合的なストレス要因に活性物質を曝露する製造経路が求められている。[3, 5, 14, 19]

NAD⁺ precursor の化学性質において、水溶液中および固体状態の安定性は極めて重要である。なぜなら、グリコシド結合またはリン酸結合モチーフの加水分解を介して反応が起こる可能性があり、また処理温度が急速な分解に先行する固体転移閾値を超える可能性があるためである。[4, 6]

ポリフェノールおよび関連する植物由来の活性物質にとって、安定性の制約には、自動酸化、エピマー化、およびキノンへの酵素的酸化が含まれ、これらは加工中の温度、pH、金属イオン、および酸素の利用可能性に敏感である。[17]

実用的な示唆として、製造設計は名目上のバルク温度のみに依存することはできず、以下を統合する必要がある：

• ガラス転移、融解、および分解開始などの熱力学的指標
• 時間、温度、pH、酸素、および（測定可能な場合は）機械的エネルギー入力に対する分解の依存性を捉える速度論モデル。[4, 9, 10, 14, 15]

本論文は、明示的な熱力学的転移および/または速度論パラメータを提供するソースから、代表的な長寿化合物および関連する生物活性物質に関する定量的証拠を統合し、それらのデータを高せん断混合、高圧均質化/マイクロフルイダイゼーション、メカノケミカルミリング、および噴霧乾燥を含む高せん断単位操作のストレスプロファイルに関連付けるものである。[1, 14, 15, 20]

2. Thermodynamic Framework

製造の文脈における熱力学的安定性は、測定可能な熱事象 (DSC/TGA) および状態記述子（例：非晶質 vs 結晶質、ガラス転移温度）を用いて実用的に評価される。これらは、化合物または製剤がより高い分子可動性を持ち、したがってより高い反応速度や異なるメカニズムを持つ状態へと転移する時期を示す。[4, 9, 15]

2.1 Gibbs Free Energy and Phase Stability

含まれるいくつかのソースは、分解プロセスまたは熱破壊に関する Gibbs free energy 変化を明示的に計算しており、特定の条件下での実行可能性の熱力学的尺度を提供している。[8, 19]

• NR borate の場合、分解の自発性は Gibbs free energy 計算を介して評価され、ΔG は 2.43 kcal·mol⁻¹ と報告された。[19]
• 熱分解条件下における rutin および脂肪酸 rutin エステルの場合、ΔG 値は正 (84–245 kJ·mol⁻¹) であり、正の ΔH (60–242 kJ·mol⁻¹) とともに、報告された分析において吸熱的かつ非自発的な熱分解プロファイルを示した。[8]

速度論的形式の観点から、いくつかのソースは transition-state および free-energy 関係を適用して、curcumin spiroborate 錯体などのシステムにおける加水分解の活性化を解釈している。[21]

2.2 Glass Transition, Melting, and Decomposition Onset

DSC および TGA は、プロセスリスクの補完的なマーカーを提供する。融解または軟化事象は拡散を急激に増加させ、迅速な化学転換を可能にする可能性があり、TGA の質量減少開始は、見かけの固体状態であっても不可逆的な分解の始まりを示す可能性がある。[4, 9, 15]

• NRCl の場合、DSC は 120.7 ± 0.3 °C での融解開始と 125.2 ± 0.2 °C での融解ピークを示し、その直後に 130.8 ± 0.3 °C でピークに達する急激な発熱事象が続く。[4]
• NMN の場合、分解は 160 °C で始まり 165 °C で完了し、162 °C に吸熱 DSC ピーク、184 kJ·mol⁻¹ の分解エンタルピーを示す。[6]
• quercetin の場合、強力な DSC 吸熱ピーク（最大 303 °C）はしばしば融解と誤認されるが、TGA データは 230 °C での分解が質量減少と重なっていることを示している。[9]
• 窒素下での curcumin の場合、240 °C から始まる多段階の分解が観察され、600 °C で 37% の残渣が残る。[18]

2.3 Amorphous and Crystalline Stability

非晶質製剤は溶解性および生物学的利用能を改善する可能性があるが、結晶形と比較して分子可動性を高めることで熱挙動および安定性を変化させる可能性があり、ガラス転移温度 (Tg) が重要な安定性パラメータとなる。[15, 16]

• メカノケミカルに調製された fisetin の amorphous solid dispersions (ASDs) は、2回目の加熱スキャンで測定可能な Tg 値を示し、相溶性と一致する Tg の組成変化を示す。[15]
• resveratrol および oxyresveratrol のナノスポンジの場合、resveratrol の融解吸熱はナノスポンジ製剤では消失し、これはカプセル化および非晶質化に起因する。[16]
• quercetin の場合、DSC/TGA の複合的な解釈により、150–350 °C の範囲で分解および構造緩和/軟化が起こることが示唆されている。[9]

3. Degradation Kinetics Models and Parameters

含まれるソースは、分解を特徴付けるためにさまざまな速度論モデル（例：一次、疑似一次、シグモイド型）および温度依存性の処理（例：Arrhenius 挙動）を用いている。[4, 7, 22]

3.1 Reaction-Order Models

溶液相の分解に関する標準的なアプローチでは、積分型一次モデルが使用される。[4, 11, 12]

• 水溶液中の NRCl 分解については、疑似一次速度論が報告されている。[4, 23]
• 噴霧乾燥された植物抽出物マーカーは、特定の化合物に対して零次および二次モデルを含む、さまざまな反応次数を示している。[20]

3.2 Arrhenius and Eyring Treatments

分解の温度依存性は、多くの場合 Arrhenius 型の式を用いてモデル化される。[4, 10, 12]

• NRCl の場合、活性化エネルギーは 75.4 から 82.8 kJ·mol⁻¹ の範囲であり、pH がこれらの値に影響を与える。[4]
• trans-resveratrol は pH 7.4 において 84.7 kJ·mol⁻¹ の活性化エネルギーを示す。[12]
• さまざまな媒体中の curcumin は、9.75–16.46 kcal·mol⁻¹ の活性化エネルギーを示す。[11]

3.3 Isoconversional and Model-Free Methods

等変換法（例：KAS、FWO、Friedman）は、多段階の分解およびメカニズムの変化を特定するために使用される。[8, 18, 25]

• rutin および脂肪酸 rutin エステルの場合、活性化エネルギーは変換度によって変化する。[8]
• resveratrol–β-cyclodextrin 包接体は、変換度とともに活性化エネルギーが増加することを示している。[25]

3.4 Coupled Thermo-Mechanical and Oxidative Degradation

高せん断製造プロセスは、機械的ストレスを局所的な加熱および酸化と結びつけ、分解経路を促進する。[13, 14, 17]

• 高せん断均質化は、回転速度とともに出口温度を有意に上昇させ、高温および酸化により深刻な ascorbic acid 分解を引き起こす。[13]
• バルブせん断、キャビテーション、乱流などの高圧均質化メカニズムは、酸化的および機械的ストレスを誘発する。[14]
• 酸化的カップリングは、高温、高酸素環境において quercetin の分解を加速させる。[26]

4. Compound-Class Review

以下の統合は、活性化エネルギー、速度定数、半減期、分解開始、およびガラス転移または融解に関連する制約など、製造モデルに関連する主要な速度論的および熱力学的パラメータを強調している。[4, 11, 12, 15, 24]

4.1 NAD⁺ Precursors

• NAD⁺ precursor の安定性は、加水分解感受性、熱的転移への感度、および酸素による酸化によって大きく影響を受ける。[4, 5]
• NRCl の分解速度論は疑似一次挙動を示し、活性化エネルギーは 75.4 から 82.8 kJ·mol⁻¹ の範囲で、pH の影響を強く受ける。[4]
• 固体状態において、NRCl は狭い熱処理ウィンドウを持ち、その融点である 120.7 ± 0.3 °C を超えると急速な分解が起こる。[4]
• NRH は酸性条件下および酸素の存在下で急速な分解を示し、その N-グリコシド結合による不安定性が浮き彫りになっている。[5]
• NMN は 160 °C 以上の温度で分解し、水溶液中では pH および温度に敏感な分解パターンを示す。[6, 27, 28]

NMN Degradation Pathway

主要な NMN 分解経路は、ニコチンアミドとリボース-5-リン酸を生じるホスホジエステル結合の加水分解として説明されており、pH 4.5 未満では酸触媒加水分解、pH 7.5 以上では塩基媒介切断としての pH 依存性が記述されている。[28]

Stilbenoids

Stilbenoids には resveratrol および関連化合物が含まれ、これらは強い pH および酸素依存性の分解を示す。実際の製剤におけるそれらの安定性は、マトリックス効果や複数の経路のために Arrhenius 補外から逸脱する可能性がある。[7, 12, 29]

水系において、trans-resveratrol は酸性 pH で安定であると報告されているが、その分解は pH 6.8 を超えると指数関数的に増加する。半減期は pH 1.2 での 329 days から pH 10 での 3.3 minutes に減少する。[12]

pH 7.4 において、trans-resveratrol の分解は、調査された温度範囲全体で一次速度論に従い、活性化エネルギーは 84.7 kJ·mol^-1 である。[12]

分解メカニズムは pH によって異なる。酸性条件下では、ヒドロキシ基は H₃O⁺ によってラジカル酸化から保護されるが、アルカリ性環境ではフェネートイオンが酸化感受性を高め、フェノキシラジカルの形成を促進する。さらに、媒体中の酸素は分解につながるラジカル反応を加速させる。[12]

水溶液中 (19 mg·L^-1) での熱安定性実験では、70 °C までの温度で 30 minutes 経過後も有意なスペクトル変化は見られない。しかし、温度が上昇すると 304 nm および 270–350 nm の範囲全体で吸光度が低下し、熱誘起分解が示される。[30]

水熱実験のメカニズム解釈では、二重結合の酸化的分裂と、ヒドロキシアルデヒド、アルコール、ヒドロキシ酸を含む分解産物の形成が提案されている。FTIR 分析により、100–120 °C でアルデヒドおよびカルボン酸の形成と一致するバンドが明らかになった。[30]

錠剤マトリックス中では、resveratrol の分解は一次単一指数関数的速度論に従い、k 値は 25, 30, および 40 °C においてそれぞれ 0.07140, 0.1937, および 0.231 months^-1 である。しかし、ln(k) vs 1/T の関係は非線形であり、super-Arrhenius と分類される。これは、高温における追加の反応、複数の経路、またはマトリックス効果を示唆している。[7]

研究によれば、加速試験は分解を過大評価する可能性があり、著者らは分解速度論を決定するための代替手法を推奨している。[7]

乾燥系におけるスチルベン様のフェノール類については、121 °C で 20 minutes の蒸気滅菌などの熱処理により、測定可能な損失（例：ピーク面積で pinosylvin が 20.98% 減少）が生じ、105 °C で 24 hours のオーブン乾燥により、いくつかのフェノール類で 50% 以上の減少がもたらされる。しかし、TGA は pinosylvin 系について ~200 °C 以上の分解開始温度を示している。[31]

Flavonoids

Flavonoids は、pH、温度、酸素、およびタンパク質結合などの製剤相互作用に敏感な多経路分解を示す。DSC/TGA におけるそれらの熱挙動は、分解と軟化の重複を伴う場合がある。[9, 22, 24]

研究によれば、媒体の pH を 6.0 から 7.5 に上げると分解が加速し、fisetin および quercetin の分解速度定数はそれぞれ 24 倍および 12 倍に増加した。さらに、温度を 37 °C 以上に上げると、速度定数はさらに増加する。[24]

• fisetin の場合：pH の上昇に伴い k は 8.30×10^-3 から 0.202 h^-1 に増加し、65 °C では 0.490 h^-1 に達した。
• quercetin の場合：pH に伴い k は 2.81×10^-2 から 0.375 h^-1 に増加し、65 °C では 1.42 h^-1 に上昇した。[24]

タンパク質共成分は分解を緩和することができ、それらの存在下で k 値が減少することによって示される。例えば、fisetin の k は 3.58×10^-2 から 1.76×10^-2 h^-1 に減少し、quercetin の k は 7.99×10^-2 から 3.80×10^-2 h^-1 に減少した。安定化は疎水性相互作用と水素結合に起因し、SDS は不安定化を引き起こす。水素結合の寄与を定量化するにはさらなる研究が必要である。[24]

中性付近の 90 °C における quercetin の場合、強い pH 効果が観察される。分解速度定数は pH 6.5 から 7.5 の間で約 5 倍に増加し、中間酸化生成物として quercetin キノンを生じ、最終生成物として protocatechuic acid (PCA) および phloroglucinol carboxylic acid (PGCA) を生じる。[22]

高温系 (150 °C) は分解を加速させ、速度定数は窒素下で 0.253 h^-1、酸素下で 0.868 h^-1、酸素および cholesterol 存在下で 7.17 h^-1 と報告されている。quercetin の損失は、窒素下での 10 minutes における 7.9% から、酸素下での 20.4% に増加し、cholesterol と酸素の併用では残存率 10.9% までさらに低下する。[26]

熱分析によると、quercetin は 90–135 °C で小さな吸熱ピーク（わずかな質量減少を伴う）を持ち、230 °C で分解し始める。303 °C における顕著な DSC 吸熱ピークは分解と重なっており、水素結合が融解のような挙動を抑制すると同時に分解を促進している。[9]

rutin (quercetin の配糖体) およびその脂肪酸エステルの場合、TGA は rutin が 240 °C まで熱的に安定であることを示しているが、エステル体はより低い初期分解温度と主要な分解段階におけるより高い質量減少を示す。活性化エネルギーは変換度に応じて 65 から 246 kJ·mol^-1 の範囲である。[8]

Cyclodextrin-Derived Carrier Systems

Cyclodextrin 由来のキャリアシステムは別の戦略を提供する。resveratrol–β-cyclodextrin 包接体は、50 °C 付近での水の放出やより高温での分解事象を含む熱的事象を示し、結合自由エネルギー（例：MM/PBSA による −86 kJ·mol⁻¹）が強力な包接相互作用を定量化している。[25]

Nanosponge Encapsulation

resveratrol のナノスポンジカプセル化は、その DSC 融解吸熱を消失させ、光保護機能を提供する。遊離の resveratrol は UV 曝露下 15 min 以内に 59.7% の分解を示すが、resveratrol ナノスポンジは約 2 倍の保護を提供し、これはカプセル化が直接的な UV 曝露を防いでいることと一致する。[16]

Amorphous Solid Dispersions

Amorphous solid dispersions はメカノケミカルミリングを介して設計することができ、fisetin と Eudragit® エステル基の間の水素結合が明確に特定されている。これは、相溶性および Tg の変化に関するメカニズム的根拠を提供し、溶解挙動の結晶化依存的な変化に対して安定化させることができる。[15]

Excipient and Carrier Selection

賦形剤の選択は速度論的メカニズムおよび安定性の結果を変化させる可能性がある。噴霧乾燥された植物抽出物システムにおいて報告されているように、反応次数および分解率時間は賦形剤混合物によって異なり、賦形剤依存的な分解速度論を示唆している。[20]

タンパク質共成分は疎水性相互作用を介してフラボノイドを安定化させ、fisetin および quercetin の k 値を低下させることができ、SDS によるこれらの相互作用の破壊は、疎水性結合が主要な安定化メカニズムであるという解釈を裏付けている。[24]

Process Engineering Controls

熱への曝露および酸素接触を低減するプロセス制御は、複数のデータセットによって直接裏付けられている。[5, 18]

NRCl の場合、DSC/qNMR の証拠は、融解開始領域 (~120–130 °C) を超えると極めて急速な分解が生じる可能性があることを示しており、加熱を伴う固体状態の操作における温度および滞留時間の厳格な上限設定を支持している。[4]

NRH の場合、25 °C における空気中と N₂ 下での半減期の差は、不活性化および酸素排除が重要であることを示唆している。著者らは、4 °C の N₂ ブランケット下のサンプルは 60 days 後も検出可能な分解を示さない一方で、4 °C の空気中のサンプルは ~10% の分解を示すと報告している。[5]

高せん断均質化について、rpm の増加が出口温度を上昇させ、酸化に敏感な ascorbic acid の損失増加と関連するという直接的な観察は、せん断による発熱を制限する工学的措置（例：冷却ジャケット、混合時間の短縮、段階的添加）を支持している。[13]

噴霧乾燥については、酸素および熱への曝露がポリフェノールを減少させ、高温が熱不安定性フェノール類に有害である可能性があるという主張は、可能な場合には出口温度を下げ、酸化および熱感受性を低減するためにカプセル化を利用するなどの選択を支持している。[3]

Antioxidants and Oxygen Management

抗酸化剤および酸素管理戦略は、ポリフェノールのデータセット全体でメカニズム的に裏付けられている。[12, 22]

90 °C における quercetin の場合、cysteine などの抗酸化剤が k を減少させ、200 μmol·L⁻¹ の cysteine はコントロールと比較して ~43% の k 低減をもたらした。メカニズム的解釈では、quercetin キノンの安定化およびラジカル消去効果が考慮されている。[22]

trans-resveratrol の場合、酸素が分解につながるラジカル反応を促進することが明示的に報告されており、アルカリ性/中性の水系加工において、可能な場合には不活性加工雰囲気または酸素バリアを使用することを支持している。[12]

リポソームシステムにおいて、resveratrol は自由ラジカルを中和することによって stigmasterol の酸化を制限し、脂質二重層に組み込まれて剛性を高め、酸素および酸化剤に対する透過性を低下させることで、システムの熱的および酸化的安定性を高めると報告されている。[35]

Discussion

ここで統合された証拠ベース全体を通して、最も強力な量的パターンは、化学的な微小環境（pH、酸素、水の存在）が穏やかな温度であっても安定性の結果を支配し得ること、およびいくつかの生物活性物質が特定の熱転移閾値において急激な安定性の不連続性を示すことである。[4, 5, 12]

NAD⁺ precursors の場合、NRCl データセットは 2 つのレジームを浮き彫りにしている。水溶液中では、疑似一次加水分解は Arrhenius 活性化エネルギーと 10 °C ごとに約 2 倍の速度上昇でモデル化できるが、固体状態では 120–130 °C 付近の狭い領域が融解とそれに続く即時の急速な分解に対応している。[4]

resveratrol の場合、主要なプロセスリスクは pH 感受性から生じる。半減期は酸性 pH での長時間から高 pH での数分へと崩壊し、一方で酸素はラジカル反応を促進する。これは、酸素移動と局所的なアルカリ性を増加させる高せん断操作が、バルク温度が中程度であっても不釣り合いに大きなダメージを与える可能性があることを示唆している。[12]

フラボノイドの場合、キノン中間体を介した酸化および pH 依存的な脱プロトン化メカニズム (quercetin) が、高温酸化およびラジカル鎖カップリング（例：酸素プラス cholesterol）と組み合わさり、脂質を含む製剤および酸素曝露が酸化的損失経路を強く増幅する可能性があることを示唆している。[22, 26]

curcumin の場合、加水分解主導の説（一部の消化管バッファー研究）と自動酸化主導の説（ミセルに焦点を当てた研究）の間にメカニズム的な緊張があるが、両者は強い pH 効果、および疎水性微小環境と酸素制限による保護的役割において一致している。[11, 32]

単位操作レベルでは、高せん断プロセスは熱を発生させ酸化感受性を高めることで、主に間接的な促進因子として機能する可能性がある。これは、回転速度が出口温度を上昇させ、ascorbic acid の酸化的損失と一致する高せん断均質化において直接実証されている。[13]

HPH/UHPH は、バルブ領域が極端なせん断、キャビテーション、および乱流を課し、高い局所温度を発生させる可能性があるため、さらなる複雑さをもたらす。ただし、滞留時間は非常に短い場合がある（例：UHPH の説明では <0.2 s）。これは、化学的な結果が、高速なラジカルプロセス、拡散制限ステップ、またはより遅い熱活性化ステップのいずれによって制御されるかに依存する可能性があることを示唆している。[14, 34]

最後に、いくつかのソースは、安定性モデルが関連するマトリックスにおいてメカニズム的に検証されなければならないことを強調している。resveratrol 錠剤のデータは non-Arrhenius 挙動とマトリックス効果を示しており、加速試験からの一般的な Arrhenius 補外を制限している。また、噴霧乾燥された植物抽出物マーカーは賦形剤依存的な速度論的次数および分解率時間を示している。[7, 20]

Conclusions

定量的な熱力学的転移マーカー (DSC/TGA) および分解速度論 (k, t_1/2, E_a, 変換依存的な活性化エネルギー) は、熱不安定性長寿化合物および関連する生物活性物質の力価を維持する製造条件を設計するための、プロセスに関連した根拠を提供する。[4, 8, 9]

NAD⁺ precursors の場合、NRCl は融解付近で狭い熱処理ウィンドウを示し、その後に急速な分解が続く。一方、水溶液中での速度論は pH 依存的な疑似一次挙動を示し、75–83 kJ·mol⁻¹ の活性化エネルギーによって熱曝露モデルをパラメータ化することができる。[4]

resveratrol の場合、pH と酸素が支配的な変数であり、半減期は酸性 pH での数百日から高 pH での数分へと崩壊し、製剤マトリックスは加速試験の補外を困難にする non-Arrhenius 挙動を生じさせる可能性がある。[7, 12]

フラボノイドおよびクルクミノイドの場合、酸化経路（quercetin のキノン中間体、curcumin の自動酸化）は、酸素制御および疎水性カプセル化戦略の動機となる。これらは、ミセル系において半減期を数桁延長し、高せん断混合下で生成された Pickering エマルションにおいても実質的に延長することが定量的に示されている。[1, 10, 22, 32]

高せん断単位操作については、利用可能な証拠により、せん断が温度を上昇させ酸化を促進し得ること（高せん断混合）、およびバルブベースの高圧プロセスが圧力、パス回数、および入口温度を主要なストレス変数として極端なせん断とキャビテーションを発生させることが示されている。これらの知見は、安定性を示す分析法を用いた時間–温度–せん断マッピングおよび PAT の実施を支持するものである。[12–14]

Conflict of Interest

著者らは、利益相反がないことを宣言する。[20]