فيروسات بورنا: تنظيم الجينوم، التضاعف النووي، وآليات التعبير الجيني

الملخص

تُعد فيروسات بورنا (مثل فيروس داء بورنا، BDV؛ وفيروس داء بورنا 1، BoDV-1) فيروسات RNA أحادية السلسلة سالبة الاتجاه وغير مجزأة، وتتمثل السمة الأكثر تميزاً لها بين فيروسات RNA سالبة السلسلة غير المجزأة (NNS-RNA) الحيوانية في أن نسخ وتكرار الجينوم يحدثان في نواة الخلية المضيفة بدلاً من السيتوبلازم بشكل أساسي [1–3]. وقد حددت الدراسات الجزيئية لفيروس BDV جينوماً مدمجاً يبلغ طوله حوالي 8.9–9 kb مع إطارات قراءة مفتوحة متعددة منظمة في عدد صغير من وحدات النسخ، وتحيط بها تسلسلات طرفية خارج السيسترون تعمل كمروجين وحدود تنظيمية لتخليق RNA الفيروسي [4–8]. ويُعد التعبير الجيني معقداً ويشمل إنتاج RNAs أحادية ومتعددة السيسترونات من نوع poly(A)+، والقراءة المستمرة المتكررة (readthrough) عند مواقع الإنهاء، واستخدام الربط (splicing) للتعبير عن المنتجات الرئيسية بما في ذلك البوليميراز (L) في بعض سياقات النسخ [4–6, 9, 10]. وقد رسمت أنظمة إعادة التشكيل الوظيفي والجينوم المصغر (minigenome) متطلبات المروج التي تعمل في الموقع (cis-acting) في الطرف الجينومي 3′ وأظهرت أن N و P يغلفان القوالب التي يتعرف عليها معقد بوليميراز L/P لتوليد كل من المنتجات التكرارية والنسخية [11, 12]. كما يساهم التنظيم النووي والنقل في تشكيل برنامج التكرار، حيث تساهم "بقع النسخ" الفيروسية (vSPOTs) والتصدير المعتمد على CRM1 للبروتين النووي في ديناميكيات RNP وتقسيم RNAs الفيروسية من نوع poly(A)+ مقابل poly(A)− [3, 13–15].

الكلمات المفتاحية

• Bornavirus[1]
• Borna disease virus[4]
• nonsegmented negative-strand RNA virus[4]
• nuclear replication[2]
• transcription readthrough[5]
• vSPOTs[3]
• minigenome[11]
• CRM1 export[15]
• phosphoprotein P[15]
• RNA-dependent RNA polymerase L[16]

مقدمة

تُعد فيروسات بورنا من فيروسات NNS-RNA التي تتماشى تسلسلاتها المتوافقة للمروج وبداية الجين مع الأنماط الملحوظة عبر عائلات Mononegavirales، مما يشير إلى منطق نسخ مشترك للسلسلة السالبة على مستوى عناصر بدء العمل في الموقع [4, 17]. ويتمثل التمييز الميكانيكي المركزي في أنه، بينما تتكاثر معظم الفيروسات أحادية السلسلة بشكل أساسي في السيتوبلازم، تتكاثر فيروسات بورنا في النواة، حيث تنشئ مواقع نووية متخصصة لتخليق RNA الفيروسي [1, 3]. وتدعم الأدلة التجريبية على وجه التحديد أن تكرار ونسخ BDV يحدثان في نوى الخلايا المصابة ويرتبطان بمعقدات البروتين النووي الريبوزي المعدية (BDV-RNPs)، مما يؤكد أن تخليق RNA لفيروس بورنا يتم في سياق RNPs النووية [4, 13]. ويتم دعم التوطين النووي بشكل أكبر من خلال التجزئة الخلوية التي تظهر أن معظم RNA لفيروس BDV ذي القطبية الجينومية المصنع حديثاً هو من نوع poly(A)− ويوجد إلى حد كبير في الجزء النووي، وهو ما يتوافق مع التكرار النووي لـ RNA الجينومي [13].

تنظيم الجينوم

حدد تسلسل ورسم خرائط جينوم BDV جينوماً خطياً يبلغ طوله حوالي 8.9 kb مع إطارات قراءة مفتوحة رئيسية متوقعة عبر الجينوم وتحيط بها تسلسلات غير مشفرة عند كلا الطرفين [4, 5]. وفي أحد التقارير، تم توقع خمسة ORFs رئيسية (I–V) في تسلسل جينوم BDV المكون من 8,903-nt، بينما أشار وصف آخر لجينوم BDV (8,910 nt) بشكل مماثل إلى معلومات مضادة للمعنى لخمسة ORFs رئيسية محاطة بـ 53 nt من التسلسل غير المشفر عند الطرف 3′ و 91 nt عند الطرف 5′ [4, 5]. بالإضافة إلى تأطير الـ ORFs الخمسة، وصف رسم الخرائط على مستوى الجينوم المضاد ثلاث وحدات نسخ وستة ORFs، كما تصف ملخصات المراجعة وبالمثل BDV بأنه يشفر ستة ORFs في ثلاث وحدات نسخ مؤطرة بأطراف متكاملة تذكر بفيروسات NNS RNA الأخرى [6, 7].

تشفر أكبر منطقة تشفير (ORF V) بروتيناً متوقعاً يبلغ حوالي 170 kDa مع تماثل قوي مع عائلة بروتين L لبوليميراز فيروسات NNS-RNA، مما يضع بوليميراز RNA المعتمد على RNA الفيروسي عند الطرف القريب من 5′ لمجموعة الجينات في التخطيط المتعارف عليه للسلسلة السالبة [4]. وحدد تحليل التسلسل المحفوظ أعلى تماثل في مجال تحفيزي مفترض مع بقايا ثابتة ومحفوظة بشكل متحفظ مجمعة في أربعة أنماط محفوظة للغاية (A–D)، وهو ما يتوافق مع القيود الإنزيمية المحفوظة على وظيفة البوليميراز بين فيروسات NNS-RNA [18]. وقد أُفيد بأن BDV-RNPs المعدية تحتوي على نوع واحد فقط من RNA لفيروس BDV، وهو RNA بطول 9-kb ذو قطبية سالبة ومن نوع poly(A)−، مما يدعم أن RNA من نوع poly(A)− بطول الجينوم هو نوع القالب المغلف في RNPs المعدية [13].

تحمل جينومات فيروس بورنا أيضاً مناطق حدودية تنظيمية نموذجية لفيروسات NNS-RNA، مع ORFs محاطة بتسلسلات حدودية غير مترجمة تتضمن إشارات بدء وإنهاء النسخ [8]. ويمكن للتسلسلات الطرفية أن تقترن كقواعد لتشكيل بنية تشبه المقبض، وفي BDV سمح محاذاة الأطراف الجينومية بتكوين مقبض طرفي مع بقاء أول 3 نيوكليوتيدات غير مقترنة، مما يربط التكامل الطرفي ببنية المروج دون الحاجة إلى ازدواجية مثالية [5]. والأهم من ذلك، أبلغت تحليلات الأطراف الجينومية لـ BDV عن نقص في التكامل الطرفي المثالي وزيادة في عدم تجانس التسلسل الطرفي أثناء الاستمرار لفترة طويلة، مما يشير إلى أن المناطق الطرفية التي تعمل في الموقع متغيرة ولكن يتم تحملها وظيفياً عبر حالات العدوى المختلفة [11].

لتلخيص بنية الجينوم والتعبير الجيني بإيجاز كما هو موصوف في هذه المصادر، يوضح الجدول أدناه العديد من السمات التنظيمية التي يتم الاستشهاد بها بشكل متكرر.

النسخ والتعبير الجيني

يشمل التعبير الجيني لفيروس بورنا في BDV العديد من RNAs تحت الجينومية متعددة الأدينيلات والمكملة للجينوم سالب الاتجاه، حيث حددت إحدى الدراسات تسعة أنواع من RNAs تحت الجينومية متعددة الأدينيلات، بما في ذلك ستة RNAs من نوع poly(A)+ متعددة السيسترونات و mRNAs أحادية السيسترونات المقابلة لـ ORFs I و II و IV [4]. وفي التحليل نفسه، لم يتم اكتشاف RNAs من نوع poly(A)+ أحادية السيسترونات لـ ORFs III و V، مما يشير إلى أن التعبير عن بعض مناطق التشفير لا تهيمن عليه رسائل أحادية السيسترونات بسيطة في BDV [4]. كما أظهرت تحليلات Northern أن BDV ينسخ كلاً من RNAs أحادية ومتعددة السيسترونات ويستخدم إشارات الإنهاء/تعدد الأدينيلات التي تذكر بفيروسات RNA سالبة السلسلة الأخرى، وهو ما يتوافق مع برنامج نسخ (توقف-بدء) الذي يؤدي مع ذلك إلى استمرارية نسخ متكررة تتجاوز مواقع الإنهاء [5].

يتضمن الإنهاء وتعدد الأدينيلات مواقع محددة وإشارة يمكن التعرف عليها. ودعمت تجارب التهجين من نوع Northern استخدام مواقع إنهاء محددة (T2 و T3 و T5 و T7) وحددت تسلسلاً متوافقاً لإشارة الإنهاء/تعدد الأدينيلات، مما يوفر معالم جزيئية لحدود النسخ وقابلية القراءة المستمرة [5]. ويتميز BDV أيضاً بتردد عالٍ لنسخ القراءة المستمرة مقارنة بفيروسات RNA سالبة السلسلة الأخرى، مما يعني أن كفاءة الإنهاء يتم ضبطها بشكل منهجي ويمكن أن تكون ضرورية ميكانيكياً [5]. وبالفعل، فإن القراءة المستمرة لـ T3 ضرورية للتعبير عن p190 (بروتين البوليميراز)، مما يربط بشكل مباشر قمع الإنهاء بتوفر البوليميراز وبالتالي بالقدرة على التكرار والنسخ [9].

تكون mRNAs الخاصة بـ BDV مغطاة (capped) ومتعددة الأدينيلات، مما يدل على أن نضج mRNA يتوافق مع إنتاج RNAs قادرة على الترجمة على الرغم من مكان التكرار النووي [19]. ويتم توليد تنوع تشفيري إضافي من خلال الربط، حيث يحتوي RNAs بحجم 2.8-kb و 7.1-kb على إنترونين يتم ربطهما بشكل تفاضلي لإنتاج RNAs تشفر منتجات متعددة بما في ذلك بروتينات G والبروتينات المرتبطة بالبوليميراز، وتشير تصريحات منفصلة إلى أن التعبير عن L يتطلب الربط وقمع الإنهاء [6, 10]. وعلى مستوى بدء النسخ وبنية المروج، لا يبدو أن التكامل الطرفي المثالي مطلوب لنشاط المروج العالي، ولم يؤدِ زيادة التكامل الطرفي إلى تعزيز التكرار مقابل النسخ بواسطة بوليميراز BDV، مما يشير إلى أن توازن التكرار والنسخ ليس مجرد وظيفة لقوة اقتران القواعد الطرفية [11].

نظرة عامة على دورة التكرار

يتم تعريف تكرار فيروس بورنا من خلال تخليق RNA النووي والتنظيم النووي لـ RNPs الفيروسية. وتقدم مصادر متعددة أدلة على أن تكرار ونسخ BDV يحدثان في النواة بالارتباط مع BDV-RNPs المعدية، مما يؤكد أن القالب الوظيفي لتخليق RNA هو معقد RNP يعمل في البيئة النووية [4, 13]. وأظهرت تجارب التجزئة والوسم الكمية بشكل أكبر أن معظم RNA ذي القطبية الجينومية لـ BDV المصنع حديثاً هو من نوع poly(A)− ونووي، مما يدعم الاستنتاج بأن تكرار الجينوم يحدث في نواة الخلايا المصابة [13].

ينبثق نمط تقسيم ثابت لفئات RNA الفيروسية المختلفة. فـ RNA الخاص بـ BDV بحجم 9-kb ومن نوع poly(A)− يكون نووياً إلى حد كبير، بينما يتم نقل RNAs من نوع poly(A)+ المصنعة حديثاً إلى الجزء السيتوبلازمي، مما يشير إلى أن تصدير mRNA والاحتفاظ بالجينوم ينفصلان عبر الغلاف النووي [13, 14]. وقد ثبت أن نقل mRNAs لـ BDV يعتمد على الطاقة، مما يعني وجود تصدير نشط بدلاً من الانتشار السلبي كنقطة تحكم رئيسية للتعبير الجيني في عدوى فيروس بورنا النووي [20].

كما تجمع فيروسات بورنا مصانع فيروسية نووية توصف بأنها "بقع النسخ الفيروسية" (vSPOTs)، مما يوفر سياقاً هيكلياً للنسخ/التكرار المركز ومعالجة RNA المنسقة المحتملة في النواة [1]. وفي BoDV-1، توجد vSPOTs المكونة من خلال فصل الطور السائل-السائل المدفوع ببروتين P في النواة وتتفاعل بشكل وثيق مع الكروماتين، بما في ذلك الالتحام بكسور DNA مزدوجة السلسلة العصبية، مما يربط مواقع التكرار بهياكل نووية فرعية محددة [3]. وتماشياً مع مركزية RNPs، أُفيد بأن معقدات BDV-RNP التي تحتوي فقط على نوع RNA بحجم 9-kb تمتلك نشاط البوليميراز المطلوب للنسخ وتحمل المعلومات الوراثية اللازمة لتوجيه تخليق جزيئات BDV الكبيرة وإنتاج جسيمات BDV المعدية، مما يربط RNPs بطول الجينوم بالخطوات اللاحقة في دورة حياة الفيروس [21].

جهاز RNP والبوليميراز

يتم تعبئة RNA الخاص بـ BDV بطول الجينوم في معقدات RNP التي تحتوي على N ومعقد بوليميراز RNA المعتمد على RNA الفيروسي، مما يحدد الجهاز الأساسي كقالب قفيصة نووية مرتبط بمعقد البوليميراز [15]. ويتكون معقد RdRp من P و L وهو مسؤول عن تكرار ونسخ الجينوم الفيروسي، مما يجعل L الوحدة الفرعية التحفيزية و P عاملاً مساعداً أساسياً للبوليميراز في BDV [15]. وتعرف الأوصاف الهيكلية والوظيفية L بشكل أكبر على أنه RdRp يبلغ وزنه حوالي 192 kDa ويشكل قلب معقد التكرار، ويقوم بالنسخ والتكرار لإنتاج mRNA فيروسي ونسخ جينومية جديدة، ويرتبط بـ P لتخليق RNA بكفاءة [16].

توفر خصائص التفاعل البروتيني لـ P رؤية ميكانيكية لوظيفة البوليميراز. حيث يرتبط P ذاتياً في أوليغومرات من خلال مجال أوليغومر مركزي ويشكل جسراً بين RdRp والقفيصة النووية، كما يعمل كمرافق لـ N للحفاظ عليه في شكل خالٍ من RNA المطلوب للتكرار، مما يدعم نموذجاً ينسق فيه P كلاً من تجنيد الإنزيم واستعداد القالب [3]. وبشكل متسق، بحث التعطيل التجريبي لأوليغومر P في مقايسة التكرار المصغر (minireplicon) فيما إذا كانت طفرات P المعيبة في الأوليغومر يمكنها إعادة تشكيل معقدات بوليميراز وظيفية، ولم تدعم أي من طفرات P التعبير عن المراسل، مما يشير إلى أن أوليغومر P مطلوب لنشاط البوليميراز في ظل هذه الظروف [22]. بالإضافة إلى ذلك، يتم تنظيم نشاط العامل المساعد P لـ BDV RdRp بشكل سلبي عن طريق الفسفرة، مما يوفر رافعة تنظيمية واضحة بعد الترجمة لوظيفة البوليميراز [15].

تربط الأشكال المتعددة للبروتين النووي لفيروس بورنا أيضاً وظيفة البروتين بالتوطين داخل الخلايا. وأظهرت التجارب التي تعبر عن p40 و p38 أن p40 نووي بشكل أساسي بينما p38 سيتوبلازمي بشكل أساسي، ومع ذلك كلاهما يربط بروتين الفسفرة P لـ BDV، مما يشير إلى أن التوطين المعتمد على الشكل المتعدد والمقترن بارتباط P قد ينظم مكان حدوث تجميع و/أو وظيفة RNP [9]. وتماشياً مع دور الاستهداف النووي لـ P، يحتوي P على إشارة توطين نووي (NLS) ثنائية قوية عند طرفه الأميني وأنماط NLS إضافية أضعف، مما يدعم الاستيراد النووي للمعقدات المحتوية على البوليميراز كشرط مسبق ميكانيكي لتخليق RNA النووي [9].

أخيراً، يمكن للبروتين الإضافي X أن يقلل بشكل مباشر من تخليق RNA في الأنظمة المعاد تشكيلها. وعندما تمت إعادة تشكيل معقدات بوليميراز BDV في خلايا تعبر عن البروتين X، لم يتم اكتشاف RNA للجينوم المصغر ذي السلسلة الموجبة، مما يشير إلى أن X يثبط كلاً من النسخ والتكرار الفيروسي في سياق تلك المقايسة [23]. وتدعم هذه الملاحظات معاً نموذجاً للجهاز يشكل فيه L و P القلب التحفيزي، وينظم أوليغومر وفسفرة P كفاءة البوليميراز، ويمكن لعوامل إضافية مثل X قمع نتاج البوليميراز في ظل ظروف محددة [15, 23].

النقل النووي

تربط فيروسات بورنا التكرار النووي بالنقل المنظم بين النواة والسيتوبلازم لمكونات RNP وأنواع RNA. وتشير الأدلة المباشرة إلى أن تكرار ونسخ BDV يحدثان في النوى حيث توجد RNPs المعدية لـ BDV، وتشير التجزئة إلى أن RNA ذي القطبية الجينومية المصنع حديثاً غني بقوة في الجزء النووي، مما يوفر دافعاً وظيفياً لمسارات الاستيراد والتصدير النووي لتنسيق دورة الحياة [13, 21]. وتشير مقايسات نقل RNA إلى أن RNAs من نوع poly(A)+ لـ BDV المصنعة حديثاً يتم نقلها بكفاءة إلى الجزء السيتوبلازمي بينما يظل RNA الجينومي بحجم 9-kb نووياً في الغالب، مما يوضح سلوك تصدير خاص بفئة RNA [14]. علاوة على ذلك، فإن نقل mRNA يعتمد على الطاقة، مع تصدير ضئيل في غياب ATP، مما يدعم آليات تصدير نشطة تعتمد على عوامل المضيف لـ mRNAs الفيروسية [20].

بالنسبة لنقل البروتين، يُعتقد أن التصدير المعتمد على CRM1 هو المسؤول عن البروتين النووي. ويتم التصدير النووي لـ N عبر مسار معتمد على CRM1 بما يتوافق مع NES، كما يشير تصريح منفصل وبالمثل إلى أن التصدير النووي لـ BoDV-N يحدث عبر مسار معتمد على CRM1، مما يشير إلى الحفاظ على طريق التصدير هذا داخل فيروسات بورنا [15, 24]. وتذكر مراجعات أوسع نطاقاً أن العديد من بروتينات BDV (بما في ذلك البروتين النووي، وبروتين الفسفرة، و X، و L) تساهم في النقل بين النواة والسيتوبلازم لـ BDV RNP، وأن التحكم في الاتجاه يتم تحديده على الأرجح من خلال النسب والتفاعلات بين عناصر NLS و NES في RNP، مما يضع النقل كخاصية ناشئة لإشارات التوطين المتنافسة بدلاً من كونه محدداً واحداً [25].

يوفر تكوين المصنع الفيروسي النووي مستوى تنظيمياً إضافياً ذا صلة بالنقل. حيث تجمع فيروسات بورنا vSPOTs في النواة، وتتشكل vSPOTs الخاصة بـ BoDV-1 عن طريق فصل الطور السائل-السائل المدفوع ببروتين P وتتفاعل بشكل وثيق مع الكروماتين، مما قد يحد من الانتشار ويوجه محتمل تموضع مواقع النسخ/التكرار بالنسبة للمعالم النووية للمضيف [1, 3].

الوراثة العكسية وعناصر المروج

تتركز إشارات التنظيم التي تعمل في الموقع لفيروس بورنا في المناطق الحدودية والطرفية غير المترجمة. وفي BDV، تكون ORFs محاطة بتسلسلات حدودية غير مترجمة تحتوي على إشارات تنظيمية لبدء وإنهاء النسخ، بما يتوافق مع بنية شبيهة بـ Mononegavirales لإشارات بدء الجين وإنهاء الجين التي توجه سلوك البوليميراز على طول الجينوم [8]. ويكون تسلسل البدء المتوافق لـ BDV المستنتج (UNCNNNUUNN) مطابقاً لذلك المستنتج من خلال مقارنة فيروسات NNS-RNA عبر عائلات Mononegavirales المتعددة، مما يدعم الحفاظ على نمط البدء الذي يستخدمه جهاز البوليميراز [4, 17]. وتشمل إشارات الإنهاء/تعدد الأدينيلات تسلسل AUUUUU سداسي محفوظ عند الطرف 5′ لكل إشارة إنهاء/تعدد أدينيلات متبوعاً بـ GG (أو CG في ORF II)، بينما لم يمكن تحديد إشارات مفترضة لـ ORF III في أحد التحليلات، مما يشير إلى كل من الحفاظ والفجوات في إمكانية اكتشاف النمط عبر حدود الجينات [4].

اختبرت مناهج الوراثة العكسية والجينوم المصغر هذه العناصر التنظيمية بشكل مباشر. حيث تم إنشاء نظام بوليميراز RNA I/بوليميراز RNA II لإعادة التشكيل داخل الخلايا لتكرار ونسخ RNA لـ BDV، مما يتيح التشريح المنضبط للمتطلبات التي تعمل في الموقع وفي مكان آخر (cis- and trans-acting) [11]. وفي هذا النظام، يتم تصنيع نظير RNA لـ BDV (الجينوم المصغر) بواسطة بوليميراز RNA I الخلوي ويحتوي على تسلسلات BDV 5′ و 3′ غير المترجمة التي تعمل في الموقع والمطلوبة لتخليق RNA بوساطة بوليميراز BDV، مما يربط المناطق الطرفية بوظيفة المروج في الخلايا [11]. ويؤدي تغليف RNA للجينوم المصغر المشتق من بوليميراز I بواسطة BDV N و P الموفرين عبر البلازميد إلى توليد قالب يتعرف عليه بوليميراز BDV المعاد تشكيله لتوجيه تخليق RNA كامل الطول للجينوم المصغر المضاد (التكرار) و mRNA تحت الجينومي يشفر جيناً مراسلاً، مما يثبت تجريبياً أن تغليف N و P كافٍ لجعل RNA قادراً على التعرف عليه من قبل البوليميراز وتخليق RNA ثنائي الناتج [11].

ويعمل رسم خرائط المروج على صقل النموذج الذي يعمل في الموقع بشكل أكبر. حيث كانت التسلسلات اللاحقة (النيوكليوتيدات 25 إلى 33) مطلوبة لنشاط المروج الأمثل، وأدى حذف النيوكليوتيدات 34 إلى 35 إلى إلغاء نشاط المراسل في هذا السياق، مما حدد متطلبات قصيرة وقريبة من المروج ومحددة الموقع في منطقة مروج الجينوم 3′ [12]. وتدعم هذه البيانات معاً بنية المروج التي تحكم فيها التسلسلات الطرفية المدمجة والعناصر اللاحقة القريبة عملية البدء والتكرار/النسخ المنتج في نظام البوليميراز المعاد تشكيله [11, 12].

آليات الاستمرار

يرتبط الاستمرار الجزيئي لفيروس بورنا بديناميكيات نهاية الجينوم، والتكرار النووي، والتنظيم النووي المتخصص. وتجدد عملية "إعادة المحاذاة والاستطالة" (realign-and-elongation) أطراف 3′ لجزيئات v- و cRNA من قوالب داخلية خلال كل جولة تكرار ولا يمكن أن تحدث إلا إذا كانت الأطراف كاملة، مما يوفر خطوة ميكانيكية واضحة تعمل كنقطة تفتيش لمراقبة الجودة لسلامة الجينوم [26]. وتوفر هذه العملية مراقبة جودة متكاملة تقمع تكرار جزيئات RNA ذات الحذف الطرفي، مما يربط منطق إصلاح النهايات بالاختيار ضد وسائط التكرار المعيبة [26]. وبشكل موازٍ، أبلغت تحليلات الأطراف الجينومية أثناء العدوى المستمرة طويلة الأمد عن درجة أعلى من عدم التجانس الطرفي في RNAs من الخلايا المصابة باستمرار مقارنة بنقاط زمنية حادة، مما يشير إلى أن الاستمرار يصاحبه تحولات في توزيع متغيرات نهاية الجينوم [11].

يرتبط الاستمرار أيضاً بسياق نووي مستقر لـ RNPs. وقد وُصفت فيروسات بورنا بأنها فريدة من نوعها بين فيروسات NNS RNA الحيوانية المعروفة التي تتكرر وتنسخ في النواة، مما يوفر إعداد التقسيم الخلوي لتخليق RNA طويل الأمد غير المحلل للخلايا ومعالجة نهاية الجينوم النووي [2]. بالإضافة إلى ذلك، يبني BoDV-1 معقدات vRNPs الخاصة به باستخدام كروماتين المضيف كدعامة، وهي خاصية يمكنها دعم الاستمرار ميكانيكياً في النواة عن طريق تثبيت تموضع vRNP بالنسبة للكروماتين [27].

كما تم ربط تعديل استجابة المضيف تجريبياً بحالات العدوى. حيث أفرزت الخلايا المصابة بـ BDV كمية أقل من SEAP مقارنة بالخلايا الصورية بعد تنشيط Pam3CSK4، مما يشير إلى أن الخلايا المصابة بـ BDV تقمع بنشاط إشارات NF-κB، وهو ما يوفر ارتباطاً على المستوى الجزيئي لتغيير الإشارات الفطرية أثناء العدوى المستمرة [28].

أسئلة مفتوحة

لا تزال العديد من الأسئلة الجزيئية مفتوحة أو مهيأة للتجريب المستهدف بناءً على النتائج الميكانيكية الملخصة أعلاه.

• ما هي المحددات التسلسلية والهيكلية التي تتحكم في كفاءة إنهاء BDV والتردد العالي لنسخ القراءة المستمرة، خاصة عند T3 حيث تكون القراءة المستمرة ضرورية للتعبير عن البوليميراز [5, 9]؟
• كيف تتداخل أحداث الربط البديل في RNAs بحجم 2.8-kb و 7.1-kb مع استخدام الحدود النسخية لإنتاج استوكيومتريات صحيحة لبروتينات G والمنتجات المرتبطة بالبوليميراز، بما في ذلك الحالات التي يتطلب فيها التعبير عن L الربط وقمع الإنهاء [6, 10]؟

• ما هي العلاقة الكمية بين عدم التجانس الطرفي الملحوظ أثناء الاستمرار ونشاط المروج، بالنظر إلى أن التكامل الطرفي المثالي ليس مطلوباً لنشاط المروج العالي وأن الأطراف تتنوع أثناء العدوى طويلة الأمد [11]؟
• كيف يتم تنسيق خطوة مراقبة الجودة "إعادة المحاذاة والاستطالة" مع تنظيم RNP النووي، بالنظر إلى أن تجديد أطراف 3′ يشتق من قوالب داخلية ويقمع تكرار RNAs المحذوفة طرفياً [26]؟
• ما هي عوامل المضيف والمعالم النووية التي تحكم تكوين وتموضع vSPOTs المفصولة بالطور والمدفوعة ببروتين P والتي تتفاعل مع الكروماتين وتلتحم بكسور DNA مزدوجة السلسلة العصبية [3]؟
• كيف يتكامل التصدير المعتمد على CRM1 للبروتين النووي وتصدير mRNA المعتمد على الطاقة لتنظيم تقسيم RNAs من نوع poly(A)+ مقابل RNA الجينومي من نوع poly(A)− عبر الغلاف النووي [13, 15, 20]؟
• بأي آلية جزيئية يقمع البروتين X تراكم RNA للجينوم المصغر، وكيف يتقاطع هذا القمع مع التنظيم السلبي المعتمد على فسفرة P لنشاط العامل المساعد للبوليميراز [15, 23]؟