Abstract
보르나바이러스(Bornaviruses) (예: Borna disease virus, BDV; Borna disease virus 1, BoDV-1)는 비분절 음성 가닥 단일 가닥 RNA 바이러스로, 동물 비분절 음성 가닥 RNA (NNS-RNA) 바이러스 중 가장 독특한 특징은 게놈 전사와 복제가 주로 세포질이 아닌 숙주 세포의 핵에서 일어난다는 점입니다[1–3]. BDV에 대한 분자학적 연구를 통해 소수의 전사 단위로 조직된 다중 오픈 리딩 프레임(ORF)과 바이러스 RNA 합성을 위한 프로모터 및 조절 경계 역할을 하는 비번역 말단 서열로 둘러싸인 조밀한 ~8.9–9 kb 게놈이 정의되었습니다[4–8]. 유전자 발현은 복잡하며, 단일 시스트론 및 다중 시스트론 poly(A)+ RNA 생성, 종결 부위에서의 빈번한 리드스루(readthrough), 그리고 일부 전사 문맥에서 중합효소(L)를 포함한 주요 산물의 발현을 위한 스플라이싱(splicing) 활용 등을 포함합니다[4–6, 9, 10]. 기능적 재구성 및 미니게놈(minigenome) 시스템은 3′ 게놈 말단의 cis-작용 프로모터 요건을 매핑했으며, N 및 P가 L/P 중합효소 복합체에 의해 인식되는 템플릿을 캡슐화하여 복제 및 전사 산물을 모두 생성함을 보여주었습니다[11, 12]. 핵 내 조직화 및 수송은 복제 프로그램을 더욱 구체화하며, 바이러스 "전사 반점"(vSPOTs)과 CRM1 의존적 핵단백질 수출이 RNP 동역학 및 poly(A)+ 대 poly(A)− 바이러스 RNA의 구획화에 기여합니다[3, 13–15].
Keywords
- Bornavirus[1]
- Borna disease virus[4]
- nonsegmented negative-strand RNA virus[4]
- nuclear replication[2]
- transcription readthrough[5]
- vSPOTs[3]
- minigenome[11]
- CRM1 export[15]
- phosphoprotein P[15]
- RNA-dependent RNA polymerase L[16]
Introduction
보르나바이러스는 NNS-RNA 바이러스로, 이들의 프로모터 및 유전자 시작 컨센서스 서열은 Mononegavirales과에서 관찰되는 패턴과 일치하며, 이는 cis-작용 개시 요소 수준에서 음성 가닥 전사 논리를 공유함을 시사합니다[4, 17]. 핵심적인 기전적 차이점은 대부분의 mononegavirus가 주로 세포질에서 복제되는 반면, 보르나바이러스는 핵에서 복제되며 바이러스 RNA 합성을 위한 특수 핵 부위를 구축한다는 것입니다[1, 3]. 실험적 증거는 특히 BDV 복제와 전사가 감염된 세포의 핵에서 일어나며 감염성 리보핵산단백질 복합체(BDV-RNPs)와 관련이 있음을 뒷받침하며, 보르나바이러스 RNA 합성이 핵 RNP의 문맥에서 수행됨을 강조합니다[4, 13]. 핵 국소화는 새로 합성된 게놈 극성 BDV RNA의 대부분이 poly(A)−이며 주로 핵 분획에서 발견된다는 세포 분획 분석을 통해 더욱 뒷받침되며, 이는 게놈 RNA의 핵 복제와 일치합니다[13].
Genome organization
BDV 게놈 시퀀싱 및 매핑 결과, 게놈 전체에 걸쳐 예측된 주요 오픈 리딩 프레임과 양쪽 말단의 비코딩 서열로 둘러싸인 선형 ~8.9 kb 게놈이 확인되었습니다[4, 5]. 한 보고서에서는 8,903-nt BDV 게놈 서열에서 5개의 주요 ORF (I–V)가 예측되었으며, BDV 게놈(8,910 nt)에 대한 다른 설명에서도 3′ 말단 53 nt 및 5′ 말단 91 nt의 비코딩 서열로 둘러싸인 5개 주요 ORF에 대한 안티센스 정보가 유사하게 언급되었습니다[4, 5]. 5-ORF 구성 외에도, 안티게놈 수준의 매핑은 3개의 전사 단위와 6개의 ORF를 설명했으며, 리뷰 수준의 요약에서도 마찬가지로 다른 NNS RNA 바이러스를 연상시키는 상보적 말단으로 구성된 3개 전사 단위 내 6개 ORF를 인코딩하는 것으로 BDV를 설명합니다[6, 7].
가장 큰 코딩 영역(ORF V)은 NNS-RNA 바이러스 중합효소인 L-단백질 계열과 강한 상동성을 갖는 예측된 ~170 kDa 단백질을 인코딩하며, 이는 전형적인 음성 가닥 레이아웃에서 유전자 세트의 5′-근위 말단에 바이러스 RNA 의존성 RNA 중합효소를 배치합니다[4]. 보존 서열 분석 결과, 불변 및 보존적으로 유지되는 잔기가 4개의 고도로 보존된 모티프(A–D)로 군집화된 추정 촉매 도메인에서 가장 높은 상동성이 확인되었으며, 이는 NNS-RNA 바이러스 간의 중합효소 기능에 대한 보존된 효소적 제약과 일치합니다[18]. 감염성 BDV-RNPs는 단 하나의 BDV RNA 종인 poly(A)− 음성 극성 9-kb RNA만을 포함하는 것으로 보고되었으며, 이는 게놈 길이의 poly(A)− RNA가 감염성 RNP 내의 캡슐화된 템플릿 종임을 뒷받침합니다[13].
보르나바이러스 게놈은 또한 NNS-RNA 바이러스의 전형적인 조절 경계 영역을 가지고 있으며, ORF는 전사 개시 및 정지 신호를 포함하는 비번역 경계 서열로 둘러싸여 있습니다[8]. 말단 서열은 염기 쌍을 형성하여 팬핸들(panhandle) 유사 구조를 형성할 수 있으며, BDV에서 게놈 말단의 정렬은 첫 3개 뉴클레오타이드가 쌍을 이루지 않은 상태로 말단 팬핸들 형성을 허용하여, 완벽한 이중 가닥 형성을 요구하지 않으면서 말단 상보성을 프로모터 구조에 연결했습니다[5]. 중요한 점은, BDV 게놈 말단 분석 결과 완벽한 말단 상보성의 부재와 장기 지속 감염 중 말단 서열 이질성 증가가 모두 보고되었으며, 이는 cis-작용 말단 영역이 가변적임에도 불구하고 감염 상태 전반에 걸쳐 기능적으로 허용됨을 나타냅니다[11].
이러한 소스에 기술된 게놈 및 유전자 발현 구조를 간결하게 요약하기 위해, 아래 표는 자주 인용되는 몇 가지 조직적 특징을 대조합니다.
Transcription and gene expression
BDV의 보르나바이러스 유전자 발현은 음성 가닥 게놈에 상보적인 다중 폴리아데닐화된 서브게놈 RNA를 포함하며, 한 연구에서는 6개의 다중 시스트론 poly(A)+ RNA와 ORF I, II, IV에 해당하는 단일 시스트론 mRNA를 포함한 9종의 폴리아데닐화된 서브게놈 RNA를 확인했습니다[4]. 동일한 분석에서 ORF III 및 V에 대한 단일 시스트론 poly(A)+ RNA는 검출되지 않았으며, 이는 BDV에서 일부 코딩 영역의 발현이 단순한 단일 시스트론 메시지에 의해 지배되지 않음을 나타냅니다[4]. Northern 분석 결과 또한 BDV가 단일 및 다중 시스트론 RNA를 모두 전사하고 다른 음성 가닥 RNA 바이러스를 연상시키는 종결/폴리아데닐화 신호를 사용함을 보여주었으며, 이는 종결 부위 너머로 빈번한 전사 연속성을 산출함에도 불구하고 정지-시작(stop–start) 전사 프로그램과 일치합니다[5].
종결 및 폴리아데닐화는 별개의 부위와 인식 가능한 신호를 수반합니다. Northern 하이브리드화 실험은 특정 종결 부위(T2, T3, T5, T7)의 사용을 뒷받침하고 종결/폴리아데닐화 신호 컨센서스 서열을 확인하여, 전사 경계 및 리드스루 경향에 대한 분자적 지표를 제공했습니다[5]. BDV는 또한 다른 음성 가닥 RNA 바이러스에 비해 리드스루 전사체의 빈도가 높은 것이 특징이며, 이는 종결 효율이 체계적으로 조정되며 기전적으로 필수적일 수 있음을 시사합니다[5]. 실제로, T3의 리드스루는 p190 (중합효소 단백질)의 발현에 필수적이며, 이는 종결 억제를 중합효소 가용성, 즉 복제 및 전사 능력에 직접 연결합니다[9].
BDV mRNA는 캡핑 및 폴리아데닐화되어, 핵 복제 틈새에도 불구하고 mRNA 성숙이 번역 가능한 RNA 생성과 일치함을 보여줍니다[19]. 추가적인 코딩 다양성은 스플라이싱에 의해 생성되는데, 2.8-kb 및 7.1-kb RNA는 G 및 중합효소 관련 단백질을 포함한 다중 산물을 인코딩하는 RNA를 산출하기 위해 차별적으로 스플라이싱되는 2개의 인트론을 포함하며, 별도의 진술은 L 발현에 스플라이싱과 종결 억제가 필요함을 나타냅니다[6, 10]. 개시 및 프로모터 구조 수준에서, 높은 프로모터 활성을 위해 완벽한 말단 상보성이 요구되는 것으로 보이지 않으며, 말단 상보성 증가는 BDV 중합효소에 의한 전사 대비 복제를 촉진하지 않았는데, 이는 복제-전사 균형이 단순히 말단 염기 쌍 형성 강도의 함수가 아님을 나타냅니다[11].
Replication cycle overview
보르나바이러스 복제는 핵 RNA 합성과 바이러스 RNP의 핵 조직화에 의해 정의됩니다. 다수의 소스는 BDV 복제와 전사가 감염성 BDV-RNPs와 연관되어 핵에서 일어난다는 증거를 제공하며, RNA 합성을 위한 기능적 템플릿이 핵 환경에서 작동하는 RNP 복합체임을 확립합니다[4, 13]. 정량적 분획 및 라벨링 실험은 새로 합성된 BDV 게놈 극성 RNA의 대부분이 poly(A)−이며 핵에 존재함을 추가로 보여주었으며, 이는 게놈 복제가 감염된 세포의 핵에서 일어난다는 결론을 뒷받침합니다[13].
서로 다른 바이러스 RNA 클래스에 대해 일관된 구획화 패턴이 나타납니다. BDV 9-kb poly(A)− RNA는 주로 핵에 있는 반면, 새로 합성된 poly(A)+ RNA는 세포질 구획으로 운반되며, 이는 mRNA 수출과 게놈 보유가 핵막을 가로질러 분리되어 있음을 나타냅니다[13, 14]. BDV mRNA의 수송은 에너지 의존적인 것으로 나타났으며, 이는 수동 확산이 아닌 능동적 수출이 핵 내 보르나바이러스 감염에서 유전자 발현의 핵심 조절 지점임을 시사합니다[20].
보르나바이러스는 또한 "바이러스 전사 반점"(vSPOTs)으로 묘사되는 핵 내 바이러스 공장을 조립하여, 농축된 전사/복제 및 잠재적으로 조정된 핵 내 RNA 가공을 위한 구조적 문맥을 제공합니다[1]. BoDV-1에서 P 단백질 유도 액체-액체 상분리에 의해 형성된 vSPOTs는 핵에 존재하며 염색질과 밀접하게 상호작용하고 뉴런 DNA 이중 가닥 절단부에 도킹하는 것을 포함하여 복제 부위를 특정 핵 하부 구조에 연결합니다[3]. RNP의 중심성과 일치하게, 9-kb RNA 종만을 포함하는 BDV-RNP 복합체는 전사에 필요한 중합효소 활성을 보유하고 BDV 거대 분자의 합성 및 감염성 BDV 입자의 생성을 지시하는 데 필요한 유전 정보를 운반하는 것으로 보고되었으며, 이는 게놈 길이의 RNP를 바이러스 생명 주기의 후속 단계와 연결합니다[21].
RNP and polymerase machinery
BDV 게놈 길이의 RNA는 N과 바이러스 RNA 의존성 RNA 중합효소 복합체를 포함하는 RNP 복합체로 패키징되며, 핵심 장치를 중합효소 복합체에 결합된 뉴클레오캡시드 템플릿으로 정의합니다[15]. RdRp 복합체는 P와 L로 구성되며 바이러스 게놈의 복제 및 전사를 담당하며, BDV에서 L을 촉매 소단위로, P를 필수 중합효소 보조 인자로 확립합니다[15]. 구조적 및 기능적 설명에 따르면 L은 복제 복합체의 핵심을 형성하는 ~192 kDa RdRp로 정의되며, 바이러스 mRNA 및 새로운 게놈 사본을 생성하기 위해 전사 및 복제를 수행하고, 효율적인 RNA 합성을 위해 P와 결합합니다[16].
P의 단백질 상호작용 특성은 중합효소 기능에 대한 기전적 통찰을 제공합니다. P는 중앙 올리고머화 도메인을 통해 올리고머 형태로 자가 결합하며 RdRp와 뉴클레오캡시드 사이를 연결하고, 또한 N을 복제에 필요한 RNA가 없는 형태로 유지하기 위해 샤페론 역할을 하며, P가 효소 모집과 템플릿 준비성을 모두 조정하는 모델을 뒷받침합니다[3]. 일관되게, 미니레플리콘 분석에서 P 올리고머화의 실험적 파괴를 통해 올리고머화 결함 P 돌연변이가 기능적 중합효소 복합체를 재구성할 수 있는지 조사했으며, 어떠한 P 돌연변이도 리포터 발현을 지원하지 않았는데, 이는 이러한 조건에서 중합효소 활성을 위해 P 올리고머화가 필요함을 나타냅니다[22]. 또한, BDV RdRp에 대한 P의 보조 인자 활성은 인산화에 의해 음성적으로 조절되며, 이는 중합효소 기능에 대한 명시적인 번역 후 조절 레버를 제공합니다[15].
보르나바이러스 핵단백질 동형 단백질(isoforms) 또한 단백질 기능을 세포 내 국소화에 연결합니다. p40 및 p38을 발현하는 실험은 p40이 주로 핵에 있는 반면 p38은 주로 세포질에 있음을 보여주었으나, 둘 다 BDV 인산단백질 P에 결합하며, 이는 P 결합과 결합된 동형 단백질 의존적 국소화가 RNP 조립 및/또는 기능이 일어나는 위치를 조절할 수 있음을 시사합니다[9]. P의 핵 표적화 역할과 일치하게, P는 아미노 말단에 강력한 이분형 핵 국소화 신호(NLS)와 추가적인 약한 NLS 모티프를 포함하고 있으며, 이는 핵 RNA 합성을 위한 기전적 전제 조건으로서 중합효소 함유 복합체의 핵 유입을 뒷받침합니다[9].
마지막으로, 보조 단백질 X는 재구성된 시스템에서 RNA 합성을 직접 하향 조절할 수 있습니다. X 단백질을 발현하는 세포에서 BDV 중합효소 복합체가 재구성되었을 때 플러스 가닥 미니게놈 RNA가 검출되지 않았으며, 이는 해당 분석 문맥에서 X가 바이러스 전사와 복제를 모두 억제함을 시사합니다[23]. 이러한 관찰을 종합하면 L과 P가 촉매 핵심을 형성하고, P 올리고머화 및 인산화가 중합효소 능력을 조절하며, X와 같은 보조 인자가 정의된 조건에서 중합효소 출력을 억제할 수 있다는 장치 모델을 뒷받침합니다[15, 23].
Nuclear trafficking
보르나바이러스는 핵 복제를 RNP 구성 요소 및 RNA 종의 조절된 핵-세포질 수송과 결합합니다. 직접적인 증거는 BDV 복제 및 전사가 감염성 BDV RNPs가 존재하는 핵에서 일어남을 나타내며, 분획 분석은 새로 합성된 게놈 극성 RNA가 핵 분획에 강하게 풍부함을 나타내어, 생명 주기를 조정하기 위한 핵 유입 및 유출 경로에 대한 기능적 원동력을 제공합니다[13, 21]. RNA 수송 분석에 따르면 새로 합성된 BDV poly(A)+ RNA는 세포질 구획으로 효율적으로 수송되는 반면 9-kb 게놈 RNA는 대부분 핵에 남아 있어, RNA 클래스별 수출 행동을 보여줍니다[14]. 또한, mRNA 수송은 에너지 의존적이며 ATP 부재 시 수출이 무시할 수 있는 수준으로, 바이러스 mRNA에 대한 능동적이고 숙주 인자 의존적인 수출 기전을 뒷받침합니다[20].
단백질 수송의 경우, 핵단백질에 대해 CRM1 의존적 수출이 관여합니다. N의 핵 수출은 NES와 일치하는 CRM1 의존적 경로를 통하며, 별도의 진술에서도 BoDV-N의 핵 수출이 CRM1 의존적 경로를 통해 일어난다고 보고하여 보르나바이러스 내에서 이 수출 경로의 보존을 나타냅니다[15, 24]. 보다 광범위한 리뷰에서는 여러 BDV 단백질(핵단백질, 인산단백질, X, L 포함)이 BDV RNP의 핵-세포질 수송에 기여하며, 방향성 제어는 RNP 내 NLS 및 NES 요소 간의 비율과 상호작용에 의해 결정될 가능성이 높다고 명시하여 수송을 단일 결정 요인이 아닌 경쟁적인 국소화 신호의 발현적 특성으로 규정합니다[25].
핵 내 바이러스 공장 형성은 추가적인 수송 관련 조직화 수준을 제공합니다. 보르나바이러스는 핵에서 vSPOTs를 조립하며, BoDV-1 vSPOTs는 P 단백질 유도 액체-액체 상분리에 의해 형성되고 염색질과 밀접하게 상호작용하는데, 이는 확산을 제한하고 숙주 핵 지표와 관련하여 전사/복제 부위의 위치를 잠재적으로 지시할 수 있습니다[1, 3].
Reverse genetics and promoter elements
보르나바이러스 cis-작용 조절 신호는 비번역 경계 및 말단 영역에 집중되어 있습니다. BDV에서 ORF는 전사 개시 및 정지를 위한 조절 신호를 포함하는 비번역 경계 서열로 둘러싸여 있으며, 이는 게놈을 따라 중합효소 행동을 유도하는 유전자 시작 및 유전자 종료 신호의 Mononegavirales 유사 구조와 일치합니다[8]. 연역된 BDV 시작 컨센서스 서열(UNCNNNUUNN)은 여러 Mononegavirales과에 걸쳐 NNS-RNA 바이러스를 비교하여 추론된 서열과 동일하며, 이는 중합효소 장치에 의해 사용되는 개시 모티프의 보존을 뒷받침합니다[4, 17]. 종결/폴리아데닐화 신호는 각 종결/폴리아데닐화 신호의 5′ 말단에 보존된 AUUUUU 6량체와 그 뒤를 잇는 GG(또는 ORF II의 경우 CG)를 포함하는 반면, 한 분석에서는 ORF III에 대한 추정 신호를 확인할 수 없었으며, 이는 유전자 경계에 걸친 모티프 검출 가능성의 보존과 격차를 모두 나타냅니다[4].
역전사 유전학 및 미니게놈 접근 방식은 이러한 조절 요소를 직접 테스트했습니다. BDV RNA 복제 및 전사의 세포 내 재구성을 위해 RNA 중합효소 I/중합효소 II 시스템이 확립되어 cis- 및 trans-작용 요건의 제어된 해부가 가능해졌습니다[11]. 이 시스템에서 BDV RNA 유사체(미니게놈)는 세포의 RNA 중합효소 I에 의해 합성되며 BDV 중합효소 매개 RNA 합성에 필요한 BDV 5′ 및 3′ 비번역 cis-작용 서열을 포함하여 말단 영역을 세포 내 프로모터 기능에 연결합니다[11]. 플라스미드로 공급된 BDV N 및 P에 의한 중합효소 I 유래 미니게놈 RNA의 캡슐화는 재구성된 BDV 중합효소에 의해 인식되는 템플릿을 생성하여 전장 안티미니게놈 RNA의 합성(복제)과 리포터 유전자를 인코딩하는 서브게놈 mRNA를 지시하며, N 및 P 캡슐화가 RNA를 중합효소 인식 및 이중 출력 RNA 합성이 가능하도록 만드는 데 충분함을 실험적으로 입증했습니다[11].
프로모터 매핑은 cis-작용 모델을 더욱 정교화합니다. 최적의 프로모터 활성을 위해 하류 서열(뉴클레오타이드 25~33)이 필요했으며, 뉴클레오타이드 34~35의 결실은 이 문맥에서 리포터 활성을 무효화하여 3′ 게놈 프로모터 영역에서의 짧고 위치 특이적인 프로모터 근위 요건을 확인했습니다[12]. 종합하면, 이러한 데이터는 조밀한 말단 서열과 인근 하류 요소가 재구성된 중합효소 시스템에서 개시 및 생산적인 복제/전사를 지배하는 프로모터 구조를 뒷받침합니다[11, 12].
Persistence mechanisms
보르나바이러스 분자 지속성은 게놈 끝 동역학, 핵 복제 및 특수한 핵 조직화와 연결되어 있습니다. "재정렬 및 연장"(realign-and-elongation) 프로세스는 매 복제 주기마다 내부 템플릿으로부터 v- 및 cRNA 분자의 3′ 말단을 갱신하며, 이는 말단이 완전한 경우에만 일어날 수 있어 게놈 무결성에 대한 품질 관리 체크포인트 역할을 하는 명시적인 기전적 단계를 제공합니다[26]. 이 프로세스는 말단 결실이 있는 RNA 분자의 복제를 억제하는 통합된 품질 관리를 제공하여, 말단 수리 논리를 결함이 있는 복제 중간체에 대한 선택에 연결합니다[26]. 이와 병행하여, 장기 지속 감염 중 게놈 말단 분석 결과 급성 시점에 비해 지속 감염된 세포의 RNA에서 더 높은 정도의 말단 이질성이 보고되었으며, 이는 지속성이 게놈 끝 변이체의 분포 변화를 동반함을 나타냅니다[11].
지속성은 또한 RNP에 대한 안정적인 핵 문맥과 관련이 있습니다. 보르나바이러스는 핵에서 복제 및 전사하는 동물 NNS RNA 바이러스 중 유일한 것으로 묘사되었으며, 이는 장기적인 비세포용해성 RNA 합성 및 핵 게놈 끝 가공을 위한 세포 구획 설정을 제공합니다[2]. 또한, BoDV-1은 숙주 염색질을 발판으로 사용하여 vRNPs를 구축하며, 이는 염색질에 대한 vRNP 배치를 안정화함으로써 핵 내 지속성을 기전적으로 지원할 수 있는 특성입니다[27].
숙주 반응 조절 또한 감염 상태와 실험적으로 연결되었습니다. BDV 감염 세포는 Pam3CSK4 활성화 후 mock 세포보다 SEAP를 적게 분비했으며, 이는 BDV 감염 세포가 NF-κB 신호 전달을 능동적으로 억제함을 시사하며, 지속 감염 중 변경된 선천적 신호 전달에 대한 분자 수준의 상관관계를 제공합니다[28].
Open questions
위의 기전적 발견을 바탕으로 몇 가지 분자학적 질문이 여전히 남아 있거나 목표 실험을 위해 배치되어 있습니다.
- 어떤 서열 및 구조적 결정 요인이 BDV 종결 효율과 특히 중합효소 발현에 리드스루가 필수적인 T3에서의 높은 리드스루 전사체 빈도를 제어하는가[5, 9]?
- 2.8-kb 및 7.1-kb RNA에서의 선택적 스플라이싱 이벤트가 L 발현에 스플라이싱과 종결 억제가 필요한 경우를 포함하여, G 및 중합효소 관련 산물의 올바른 화학량론을 산출하기 위해 전사 경계 사용과 어떻게 상호작용하는가[6, 10]?
- 높은 프로모터 활성을 위해 완벽한 말단 상보성이 요구되지 않고 장기 감염 중 말단이 다양해진다는 점을 고려할 때, 지속성 동안 관찰되는 말단 이질성과 프로모터 활성 사이의 정량적 관계는 무엇인가[11]?
- 3′ 말단 갱신이 내부 템플릿에서 유래하고 말단이 결실된 RNA의 복제를 억제한다는 점을 고려할 때, 재정렬 및 연장 품질 관리 단계가 핵 RNP 조직화와 어떻게 조정되는가[26]?
- 염색질과 상호작용하고 뉴런 DNA 이중 가닥 절단부에 도킹하는 P 유도 상분리 vSPOTs의 형성과 위치를 어떤 숙주 인자와 핵 지표가 지배하는가[3]?
- 핵단백질의 CRM1 의존적 수출과 에너지 의존적 mRNA 수출이 어떻게 통합되어 핵막을 가로지르는 poly(A)+ RNA 대 poly(A)− 게놈 RNA의 구획화를 조절하는가[13, 15, 20]?
- X 단백질은 어떤 분자 기전으로 미니게놈 RNA 축적을 억제하며, 이 억제는 P 인산화 의존적 중합효소 보조 인자 활성의 음성 조절과 어떻게 교차하는가[15, 23]?
